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标题:【讨论帖】蛋白分离，质谱高手请进：如何去除蛋白质...

qqq111[使用道具]
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发表于 2013-11-10 20:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【讨论帖】蛋白分离，质谱高手请进：如何去除蛋白质...


现在有要对胰酶消化的肽段溶液进行除盐（碳酸氢铵），然后进行后续的实验。鉴于碳酸氢铵具有挥发性的特征，因此有文献介绍可以用真空离心浓缩的方法（但没有细节）！碳酸氢铵的性质比较特殊，在60摄氏度即可完全分解，那么如果真空离心的时候，温度设定为60摄氏度，虽可促进碳酸氢铵的分解，但是否也极有可能应先个肽段的稳定性？请各位大侠，有经验，感兴趣的，畅所欲言！
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glass[使用道具]
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发表于 2013-11-10 20:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
买几个小分子量的超滤管，离心去除你不想要的盐
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发表于 2013-11-10 21:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

C18去除盐份，超滤管 不可以用，因为已经消化为肽段了
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2013-11-10 21:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

肽稳定的话,直接加热可分解.还可抽真空.因为它是挥发性盐.
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发表于 2013-11-10 21:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

几乎没有可能影响肽段的稳定性。大部分文献都是用碳酸氢铵做酶解的，还有用iTRAQ时候用TEAB，最后都是真空干燥的，这是标准操作。如果你担心的话可以把温度降到30度以下，或者用冷冻干燥。而且高温就会影响肽段稳定性吗？没有这方面的经验，但是我记得有时候我们还煮肽段做western blotting，好像也没有什么影响。
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qqq111[使用道具]
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发表于 2013-11-10 21:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
买几个小分子量的超滤管，离心去除你不想要的盐

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超滤管的最小分子量为3KD，对肽段不太适用。
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qqq111[使用道具]
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发表于 2013-11-10 21:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
C18去除盐份，超滤管 不可以用，因为已经消化为肽段了

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C18除盐也是一个很好的方法，不过这个过程肯定会有肽段的损失。
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qqq111[使用道具]
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发表于 2013-11-10 21:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
肽稳定的话,直接加热可分解.还可抽真空.因为它是挥发性盐.

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我专门请假了蛋白质组学领域的以为大牛，他说用室温真空离心干燥即可将碳酸氢铵挥发。碳酸氢铵为什么会在真空离心时直接挥发呢？
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qqq111[使用道具]
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发表于 2013-11-10 21:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
几乎没有可能影响肽段的稳定性。大部分文献都是用碳酸氢铵做酶解的，还有用iTRAQ时候用TEAB，最后都是真空干燥的，这是标准操作。如果你担心的话可以把温度降到30度以下，或者用冷冻干燥。而且高温就会影响肽段稳定性吗？没有这方面的经验，但是我记得有时候我们还煮肽段做western blotting，好像也没有什么影响。

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谢谢，你在真空离心干燥时，采用多少温度呢？我感觉这其中所需的时间太长，比如0.5mL的碳酸氢铵溶液可能需要好几个小时。
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tudou85[使用道具]
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发表于 2013-11-10 21:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
因为铵很容易分解，特别是碳酸氢铵，真空或加热可分解为氨气，二氧化碳。
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