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标题:【求助】western背景太深的问题 急死了 做了很多次都这样

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发表于 2013-11-10 22:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】western背景太深的问题 急死了 做了很多次都这样


一抗来自santa cruz 比例为1:600 4度过夜
二抗比例为1:4000 2小时
3%的BSA封闭2小时
上样量60ug

目的条带应该靠近55


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2013-11-10 22:35
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发表于 2013-11-10 22:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一抗1;600
二抗1:6000
3%BSA+5%牛奶 3小时


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发表于 2013-11-10 22:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一抗1:600
二抗 1:4000
封闭 不记得了


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发表于 2013-11-10 22:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一抗 1:1000 3小时
二抗 1:4000 过夜
5%牛奶封闭 3小时


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发表于 2013-11-10 22:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同上是一张膜, 洗脱后1:1800 一抗再次孵育
二抗:1:4000
洗脱后没有用牛奶封闭


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发表于 2013-11-10 22:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

每次整个膜都是亮的, 抗体稀释后整个膜也是亮的 就是暗一些. 不知道再该怎么办来降低背景. 感觉下面actin的杂带比目的蛋白的带还要深. 希望大虾们救救我,郁闷至极!
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发表于 2013-11-10 22:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你是压片还是扫膜?
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发表于 2013-11-10 22:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 bluelake 于 2013-11-10 22:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你是压片还是扫膜?

是胶片
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发表于 2013-11-10 22:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
每次整个膜都是亮的, 抗体稀释后整个膜也是亮的 就是暗一些. 不知道再该怎么办来降低背景. 感觉下面actin的杂带比目的蛋白的带还要深. 希望大虾们救救我,郁闷至极!

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cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5936631&sty=1&tpg=1&age=-1')
见１楼　注７，愿对你所帮助
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鹿奔奔[使用道具]
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发表于 2013-11-10 22:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个我以前看过 我现在处理了封闭,稀释一抗浓度,稀释二抗浓度,还是有背景.还真没试过加大浓度. 不过我大多的膜都很亮很亮,上面的几个片子也就15秒到30秒. 不过我还是会再试试高浓度的..我不理解的是 为什么marker也那么亮.
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