蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】SDS-PAGE之怪现象(蛋白电泳 漏样)，求解

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 33  1/4 1234››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】SDS-PAGE之怪现象(蛋白电泳 漏样)，求解

seagate[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 114508
精华 0
积分 601
帖子 922
信誉分 100
可用分 5343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
1

发表于 2013-11-11 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE之怪现象(蛋白电泳 漏样)，求解


跑了4年的蛋白电泳了，最近处现在浓缩胶，样品“漏下去”的现象，导致混样。更换配电泳的试剂，仍未解决。样品是大肠杆菌表达菌体。同时也发现10次有9次漏，也能碰上不漏的情况。

焦急万分，为此，我常偷偷哭泣，肯请战友解答，感激。


查看积分策略说明
附件
2013-11-11 10:33
19907301.snap.jpg (24.83 KB)
 
顶部
wu11998866[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73743
精华 0
积分 569
帖子 797
信誉分 100
可用分 4850
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-27
状态 离线
2

发表于 2013-11-11 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我昨天做了一次电泳，发现下方总有一条红色的线，随着电泳进行而前进，很像楼主图上下面那条线，不知道是不是也漏胶
顶部
rxcc33[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79965
精华 0
积分 633
帖子 885
信誉分 100
可用分 5303
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-18
状态 离线
3

发表于 2013-11-11 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感觉还是胶的问题，胶和玻璃板、浓缩胶和分离胶之间都有空隙。
玻璃板是不是夹得太紧了啊，这样拔梳子的时候容易出这样的问题
还有就是胶配好后放冰箱也容易出这样的问题
顶部
seagate[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 114508
精华 0
积分 601
帖子 922
信誉分 100
可用分 5343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
4

发表于 2013-11-11 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
电泳装置是BIO-RaD的，还凑合。

凝胶是放在28度温箱中，从未放冰箱。
顶部
ffooll[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73418
精华 0
积分 437
帖子 574
信誉分 100
可用分 3666
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-22
状态 离线
5

发表于 2013-11-11 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感觉是在胶与板之间漏出来的，是不是浓缩胶配得不好？或者是楔子没插紧，胶板里面进空气了
顶部
seagate[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 114508
精华 0
积分 601
帖子 922
信誉分 100
可用分 5343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
6

发表于 2013-11-11 10:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不是漏在胶与板之间。

因为脱色后发现空白泳道也出现了蛋白。纯化的单一条带的蛋白也出现了杂带。

苦恼中......
顶部
hyuu[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79232
精华 1
积分 626
帖子 847
信誉分 102
可用分 5149
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-8
状态 离线
7

发表于 2013-11-11 10:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是所有的泳道出现同样的杂带吗？电泳缓冲液污染了没有？空白泳道也出现条带，一般要么是别的孔上样时溢孔了，要么是电泳缓冲液污染了，缓冲液母液、容器、电泳槽都仔细检查看看。
顶部
seagate[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 114508
精华 0
积分 601
帖子 922
信誉分 100
可用分 5343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
8

发表于 2013-11-11 10:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

每次电泳缓冲液都现用现配，一次性使用。电泳槽，都用去离子水冲洗。

关键是“漏样”这个现象怎么解释？！
顶部
yyaxw84[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114481
精华 0
积分 307
帖子 334
信誉分 100
可用分 2444
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
9

发表于 2013-11-11 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
样品是什么？也有可能是样品的问题
顶部
seagate[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 114508
精华 0
积分 601
帖子 922
信誉分 100
可用分 5343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
10

发表于 2013-11-11 10:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #9 yyaxw84 的帖子

大肠杆菌表达的蛋白~~~~~~~~~~~~
顶部
 33  1/4 1234››