小中大我表达过的重组蛋白中有好几种存在主任遇到的情况,结果也各不相同。印象很深的是,在表达Sak时,基因中段也是有连续几个原核稀有密码子(AGA,AGG),定点突变麻烦,但在大肠杆菌中的表达量也高达50%以上。再,个人认为,稀有密码子的位置还是有影响的,位于5’端影响更大。我在做另一个基因的功能分析时,曾分别定点突变了5’、3’和中间的几个氨基酸,同时也顺便改造了这三个区段内的几个稀有密码,发现5’修改后表达量有显著改善。当时设想表达翻译的时侯,是否存在一些近似于物理中的“惯性”?呵呵。
理论和实际是有差距的,我说得现象也不能说是共性的东西。做了一些表达,个人的感觉基因是很有“个性”的。当然,也许我们做得还不够多,未能充分领略其中的奥妙。不管怎么样,我建议主任不妨先试试,克隆表达的操作程序现在毕竟已经是不算复杂了。