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标题:【求助】酵母质粒提取

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发表于 2013-11-12 21:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】酵母质粒提取

在提取酵母质粒的时候，有一步用到玻璃珠，谁能告诉我玻璃珠的作用，而且在哪能买到玻璃珠，贵不贵？谢谢！
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2013-11-12 21:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在高盐浓度条件下，DNA吸附于玻璃珠上，吸附了DNA的玻璃珠经离心、洗涤去掉盐和杂物后，进行洗脱重悬于水或TE缓冲液中。DNA回收率高而无降解，操作简单、快速、方便。
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HP007[使用道具]
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发表于 2013-11-12 22:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵，就是酵母质粒DNA吸附于玻璃珠上，经过处理后再洗脱下酵母质粒DNA。
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发表于 2013-11-12 22:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 mamamiya 于 2013-11-12 21:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

在高盐浓度条件下，DNA吸附于玻璃珠上，吸附了DNA的玻璃珠经离心、洗涤去掉盐和杂物后，进行洗脱重悬于水或TE缓冲液中。DNA回收率高而无降解，操作简单、快速、方便。 ...

酵母质粒DNA不会吸附于玻璃珠上吗？
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2013-11-12 22:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
玻璃珠SIGMA有，可以问问代理。
也可以使用蜗牛酶裂解法破酵母细胞壁法。
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发表于 2013-11-12 22:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

能给我具体说说蜗牛酶裂解法的步骤吗？谢谢。另外你知道玻璃珠的作用吗？它应该是吸附酵母染色体DNA吧，而不是质粒DNA。你用过没有，它贵不贵，因为我们老板比较小气，所以在买药品方面比较慎重。在用玻璃珠的那种方法中，其它药品都齐了，就差玻璃珠了。谢谢！
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发表于 2013-11-12 22:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
呵呵，就是酵母质粒DNA吸附于玻璃珠上，经过处理后再洗脱下酵母质粒DNA。

==============================================================================================================

应该是酵母染色体DNA吸附于玻璃珠上吧，因为在这种方法中，根本就没有用TE洗玻璃珠，只是用的上清液，而在提取酵母核DNA的时候就要洗玻璃珠。所以我猜想是酵母染色体DNA吸附于玻璃珠上，你说对吗？希望能给我回答，谢谢！你就用的这种方法提取酵母质粒吧，玻璃珠贵吗?
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nikun230[使用道具]
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发表于 2013-11-12 22:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

告诉你一种简便实用的提取酵母质粒的方法，其纯度完全可以用来测序和做PCR。你可以尝试一下。
氯化苄提取真菌基因组的方法。在1.5ml Appendorf管中加入0.1g菌体和500ul提取液，振荡使之充分混合，再加入10％SDS100ul，氯化苄300ul，剧烈振荡，使管内混合物成乳状。50度保温1h，每隔10min振荡混合一次，然后加入300ul 3mol/LNaCl（ph＝5.2），混匀，冰水浴15min，6000rpm，15min，收集上清，加入等体积无水乙醇，室温沉淀20min，这时会有絮状沉淀出现。10000rpm，15min，沉淀用70％乙醇洗一次，室温尽量挥发残留的痕量乙醇，但不要让DNA完全干燥，加入50ulTEbuffer溶解DNA。
提取液：0.1mol/LTris-HCL,PH=9.0+0.04mol/LEDTA,PH=8.0

整个过程也就氯化苄可能需要购买，不过它的价格也非常便宜，500ml只需要32元。^_^
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发表于 2013-11-12 22:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 nikun230 于 2013-11-12 22:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

告诉你一种简便实用的提取酵母质粒的方法，其纯度完全可以用来测序和做PCR。你可以尝试一下。
氯化苄提取真菌基因组的方法。在1.5ml Appendorf管中加入0.1g菌体和500ul提取液，振荡使之充分混合，再加入10％SDS100ul，氯化苄3 ...

超级感谢。是不是这种方法也会把酵母核DNA一起沉淀下来?期望你的回答！
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911[使用道具]
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发表于 2013-11-12 22:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
氯化苄提取DNA的参考文献有没有呀？需要依据呀，谢谢！
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