小中大昨天又跑胶了，按高手们给的意见做了 我是这样改善的内参一抗稀释没变，二抗上次为（1:2500），这次变为1:5000，封闭五小时，洗膜四次，每次15分钟，内参曝出来了很漂亮。目的蛋白我也改善了，同时跑了两块，剪成不同的小块加不同的一抗二抗浓度，有的把一抗稀释倍数提高一倍，有的把二抗稀释倍数提高一倍，有的同时提高，几张膜都是封闭5小时，两次抗体后的洗膜都是四次，每次15分钟，结果只有一抗没变并二抗稀释倍数提高一倍的那一张爆出来了，还是背景很深，怎么办呢？？我一抗说明书上建议的稀释倍数是（1:200~1:1000），我做了1:200的有条带但背景很深，1:500没有背景也没有条带。
