蛋白质与蛋白组学

a 带出来了 但不齐

b 你是用santa的兔抗还是鼠抗 兔抗的话 首先考虑 抗体不行
santa的兔抗很坑爹
c abcam的抗体因为很多做代工 现在也慢慢坑爹了

问题可能的原因
1.抗体问题
2.蛋白表达量怎么样
3.wb步骤是否合理 100v 2h可以把你这几个蛋白都转上了

============================================================================================

谢谢拉。
针对您的问题
1.b图分子量为50KD的是santa的兔抗，我已经向试剂商投诉了，不知道后面结果怎样。
c中两个120KD分子量的目的蛋白，一个是abcam的鼠抗，一个是santa的鼠抗。是不是santa的背景做出来一般都比较深？
2.50KD的蛋白表达量还比较高，120KD的比较少，所以下一步只能增大上样量了，但是我之前提的蛋白浓度比较低。唉~
3.您说的是转膜条件用100v恒压转2h？我现在的实验室都是恒流的，还没有用过您这种方法

a感觉不匀,不知道是你转膜的原因还是probe的原因,或者样品本身就不一样多
b竖着的条带是因为一抗的原因,没办法,换一个吧,其实也不影响你的结果
c
感觉你的目的蛋白浓度不高,尽量多点一些吧,你看人家santa的sample图例里面很多都用了50ug左右的total protein吧一抗浓度1：500差不多,二抗适当升高一些,还有就是你在incubate的时候尽量多放一点buffer和antibody,咋说要让膜均匀的泡在里面另外,如果你用commercial的ECL kit来曝光的话可能能增加你的信号强度

===================================================================================

谢谢您的回答：）
a.深浅不均可能是因为样品本身的原因，我用了统一的上样体积，没有调整总上样量
b.我已经准备换抗体了。另：您是指这种竖着的条带不影响结果？但是我用的Image J不大好进行灰度分析。
c.看了这么多建议，我只能增加上样量了。。
ps：二抗1：8000可以吗？
pps：c中孵一抗的时候我一个是1：1000（abcam），一个是1：500（santa）
ppps：曝光的时候我用的是碧云天的ECL发光液，应该是您说的commercial的了吧？
我现在觉得每一步都是壁垒啊，处处都是问题。。。