小中大我所说的一个表达框，包括启动子、终止子、读码框等:）嘿嘿。。得包含完整的表达元件。不过真核生物不是用的RBS，AUG的有效起始需要的是Kozak序列。
2段蛋白分别构建到同一个载体上，共转染293是可以实现共表达的，因为：在瞬转的情况下，基因不需要复制即可表达；在稳转的情况下，基因可以同时整合到基因组中，同样可以共表达。
而在大肠杆菌中，大肠杆菌分裂很快，质粒如果不能在大肠杆菌中复制，会在培养的过程中迅速丢失。如果需要两个质粒分别携带不同基因转化后共表达，需要两种质粒都稳定复制。因此这两个质粒属于不同的不相容群，携带不同的抗生素，则可以在双抗生素压力下实现共表达。当然也有人将同一不相容群的不同抗性的质粒转化大肠杆菌，同时使用两种抗生素的压力维持两种质粒的存在而实现共表达。
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长见识了
传送门
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Kozak序列－－一个重要的名词
Kozak序列, 名词, 三元, 转录, GTP
Kozak sequence
KOZAK是一个女科学家，她研究过起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响，并总结出在真核生物中，起始密码子两端序列为：——G/N-C /N-C/N-ANNATGG——，如GCCACCATGG、GCCATGATGG时，转录和翻译效率最高，特别是-3位的A对翻译效率非常重要。该序列被后人称为Kozak序列，并被应用于表达载体的构建中。
(在真核起始过程中，由Met-tRNAi，eIF-2和GTP形成了三元复合体（ternary complex）再结合40S小亚基形成前起始复合物(preinitiation complex)。此复合物的形成分为二步：首先GTP和eIF-2结合，以增加此因子与Met-tRNA．结合的效率。然后三元复合体再与40S亚基结合。核糖体结合位点由起始密码子所决定，在某些起始密码子上游邻接序列也可能十分重要，被称为Kozak序列(ACCAUGG)，它相当于原核的S-D序列。前起始复合物结合5′7meG帽结构并沿着mRNA扫描，借助Kozak序列搜寻第一个起始密码子。)
所谓Kozak规则，即第一个ATG侧翼序列的碱基分布所满足的统计规律，若将第一个ATG中的碱基A，T，G分别标为1，2，3位，则Kozak规则可描述如下：
(1) 第4位的偏好碱基为G；
(2)ATG的5’端约15bp范围的侧翼序列内不含碱基T；
(3)在-3，-6和-9位置，G是偏好碱基；
(4)除-3，-6和-9位，在整个侧翼序列区，C是偏好碱基。
Kozak规则是基于已知数据的统计结果，不见得必须全部满足，一般来说，满足前两项即可。
KOZAK写的那篇关于KOZAK序列的文献：
文献名字：Compilation and analysis of sequences upstream from the translational start site in eukaryotic mRNAs
作者：Marilyn Kozak
