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标题:【讨论帖】于蛋白电泳问题总结

fqswdzd[使用道具]
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发表于 2013-11-16 10:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【讨论帖】于蛋白电泳问题总结

一、SDS电泳

SDS-PAGE前两条Marker样品弥撒原因

我最近跑SDS-PAGE前两条Marker样品总是很弥撒，不知道是什么原因，我想问题出在胶上或电泳缓冲液，请高手指点！/b]

[ 本帖最后由 fqswdzd 于 2013-11-16 11:04 编辑 ]
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2013-11-16 10:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 fqswdzd 于 2013-11-16 10:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
一、SDS电泳

我最近跑SDS-PAGE前两条Marker样品总是很弥撒，不知道是什么原因，我想问题出在胶上或电泳缓冲液，请高手指点！

样品盐浓度太高.....电泳时发热,没放到4度下跑.....
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2013-11-16 10:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 fqswdzd 于 2013-11-16 10:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
一、SDS电泳

我最近跑SDS-PAGE前两条Marker样品总是很弥撒，不知道是什么原因，我想问题出在胶上或电泳缓冲液，请高手指点！


这种现象我偶然也会遇到！
不知你现在解决了没有？
估计可能是SDS在低温状态溶解不好所致，因为以前（夏天）做的都不存在这个问题；此外，样品没有脱盐也会出现扩散的。个人认为倒是不必4度下跑的。
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发表于 2013-11-16 10:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 fqswdzd 于 2013-11-16 10:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
一、SDS电泳

我最近跑SDS-PAGE前两条Marker样品总是很弥撒，不知道是什么原因，我想问题出在胶上或电泳缓冲液，请高手指点！

我们实验室遇到过三楼说的问题，后来找到原因了，是因为冬天温度太低胶凝得不好。后来我们冬天做电泳都要把空调开到三十度然后制胶，热死了。没有空调间的话可以把胶放到三十度的培养箱里。我们一开始是这样的，后来发现那样不容易放平，所以后来一直是在空调房里做。楼主的问题可能也差不多。
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发表于 2013-11-16 10:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 fqswdzd 于 2013-11-16 10:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
一、SDS电泳

我最近跑SDS-PAGE前两条Marker样品总是很弥撒，不知道是什么原因，我想问题出在胶上或电泳缓冲液，请高手指点！

其实在冬天可以将AP和TEMED分别增加少许,就可以促进胶的聚合了.
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fqswdzd[使用道具]
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发表于 2013-11-16 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

SDS我是放在37度温箱中溶解的，胶凝的很好，只要试剂新鲜没有问题，聚合时间延长胶可以聚合得很好，温度升高是可以加快胶聚合的。蛋白条带弥散，我想原因有
１.样品没有脱盐（含50mM NaH2PO4、300mM NaCl)，有最简单的脱盐方法吗？如果是样品盐浓度太高，为什么marker也出现同样的问题？
３.是不是上样buffer的问题？需要重新配制吗？
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junjie05[使用道具]
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发表于 2013-11-16 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 fqswdzd 于 2013-11-16 10:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

SDS我是放在37度温箱中溶解的，胶凝的很好，只要试剂新鲜没有问题，聚合时间延长胶可以聚合得很好，温度升高是可以加快胶聚合的。蛋白条带弥散，我想原因有
１.样品没有脱盐（含50mM NaH2PO4、300mM NaCl)，有最简单的脱盐方法吗？如 ...

你的Marker是自己用粉剂配的么？如果是，可以90%肯定是你上样Buffer的问题，需要重配。
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fqswdzd[使用道具]
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发表于 2013-11-16 10:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #7 junjie05 的帖子

Marker是用粉剂配的，配成20ul在-20度保存，我准备重新配上样Buffer。
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8princess8[使用道具]
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发表于 2013-11-16 10:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得还是配胶时聚合的问题，我们组里现在那帮小朋友就时好时不好的，SDS的现象不知wangjun2002274 刻意注意过没有啊?

如果发现别的原因还望不吝赐教。
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fqswdzd[使用道具]
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发表于 2013-11-16 10:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也不能保证每次配胶的时候都能１００％的聚合得好，个人认为如果室内温度达２５度，分离胶聚合时间超过６０分还没有聚合的话，应该考虑试剂的问题，ＡＰ、ＳＤＳ和３０％储备胶最容易出问题，如果分离胶能聚合，浓缩胶聚合就没有问题。
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