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标题:【求助】明胶酶谱结果有三四条清晰的条带？

zhy平平[使用道具]
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发表于 2013-11-17 20:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】明胶酶谱结果有三四条清晰的条带？

最近在做明胶酶谱实验，第一次做还好，在72KD和92KD各显示出条带。后来又做了一次不知为什么在34KD和49KD之间又多了两条带，而且还很清晰，现把图片发上去，请各为高手指教一下。谢谢！
最上面那一条比较浅的为92KD，中间最亮的一条为72KD，最下面的两条处于34KD和49KD之间


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2013-11-17 20:34
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cocacola[使用道具]
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发表于 2013-11-17 20:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你好，我做了很多次都没出来结果，我想看一下你的配方和试验方法，还有你觉得在实验中要注意什么？能回复万分感谢！谢谢！
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2013-11-17 20:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有可能是蛋白酶部分降解了
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damingxia0904[使用道具]
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发表于 2013-11-17 20:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白酶降解成多段了，但这几段的催化结构域还在，所以还保持活性。建议，用保存好的，新的蛋白，再试试阿
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发表于 2013-11-17 20:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也做明胶酶谱试验，做了几次都没有任何条带，现在急于找个阳性对照来验证下是否是试验过程的问题，还是就是所测标本的MMP-9表达水平低下造成的。能否给我说下这方面的信息和具体做法？不胜感激了！
我的邮箱
谢谢了！
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tudou85[使用道具]
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发表于 2013-11-17 20:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

条带做的真漂亮。最近也需要做这方面实验，正在学习中。
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发表于 2013-11-17 20:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教一下，做明胶酶谱分析法跑电泳的仪器用western blot的可不可以？还有分离胶和浓缩胶的配方能否告知？各需几毫升？
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发表于 2013-11-17 20:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以进行WB啊
配胶方法与gelatin zymography略有不同
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zhy平平[使用道具]
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发表于 2013-11-17 20:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
protocal请参考cuturl('http://protein.dxy.cn/bbs/topic/18969485')
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veiwu[使用道具]
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发表于 2013-11-17 20:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

lz的条带好漂亮啊，能不能请教几个细节，上样量每孔多少ug，明胶的最终浓度，还有最后的孵育时间是多久啊，我最近也在做，用的是细胞浓缩上清，感觉整张胶从上到下都有好多复染带啊，不像你的那么单一清晰。。。。郁闷
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