各位朋友，对梯度延迟体积应该很熟悉了，即梯度混合点到柱头之间的管道体积（类似热水器和莲蓬头之间的热水管体积，当你打开热水器时，是先放完管子里面的冷水再放出来的是热水），它对梯度分离和方法移植有着重要影响，因此在使用仪器之前，有必要对系统的梯度延迟体积有所了解，通用的方法为：不连接色谱柱，流动相A为水，B为0.1%丙酮-水溶液，运行一个20分钟的全梯度0-100%B，波长设为265nm，色谱图如下：
通过对上述色谱图的分析，相信你肯定能够计算出你使用的液相的梯度延迟体积。
但这种情况有点大费周章，操作起来不是很方便，除非仪器刚买来，对仪器进行性能确认时可从头这样做。最近在看一帖子谈过去拍武侠电影的特技时，常有大侠从地面飞到高墙上，说那是先拍一段让人从墙上跳下来的片子，然后再倒着放回去就有那效果了，在这一启发和对上面那张图的分析，以及日常队梯度设置的认真分析后，自创了一个小技巧:
注意上面梯度设置表中红框里两栏，由于梯度切换在0.1秒内快速切换，最后在色谱图中会出现一个尖锐的跳跃出现，即下方图谱中37.459分钟出现的尖峰，由于系统的梯度延迟体积的作用，在35.1分钟设置梯度切换，直到37.459分钟才出现大的跳跃，这两者的时间差即为梯度延迟时间（37.459-35.1=2.359分钟），再乘上流速（1.0ml/min)就得到延迟体积了（2.359X1.0=2.359ml），可能会有些小误差，但比忽略延迟体积的存在就小多了，我用这种方法测出来的体积，将它用于DRYLAB色谱模拟软件上，模拟结果和实际色谱图中的保留时间的相对误差小于1.0%。所以这方法还是蛮管用，希望能够对大家起到一点帮助。先谢谢啦！：）
在色谱图中，最前面的1.533分钟的峰为系统死体积，即色谱柱进口到检测器进口之间的体积，由于现在使用的管道内径都非常细（微米级别），这种管道体积也就忽略不计了，因此这一体积也就大致相当色谱柱的体积了。
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ybsmart2004网友
