液相色谱

合成色素的测定国标法中 -- 高效液相色谱法中
梯度洗脱：甲醇  20-35%，3%/min;  35-98 %，9%/min:   98%继续6min

每次梯度洗脱后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复初始状态。让10-30倍的柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。

那我想请教一下大家：这里所说的初始状态是不是就是：甲醇  20%：乙酸铵 80%啊？

那这样的话，从甲醇98%：乙酸铵2% 到甲醇  20%：乙酸铵80%，乙酸铵会不会在甲醇中析出结晶，把色谱柱给堵了啊？？？

没有见到乙酸铵,那应该是水!

不会的，乙酸铵是溶于甲醇的。

谢谢！那乙酸铵是缓冲盐，流动相从乙酸铵换成甲醇，之间要用水过渡，就是怕乙酸铵在甲醇中析出，堵了柱子啊！所以我就是怕乙酸铵从2%一下子增加到 80%，会不会在甲醇中析出的？？

还有，我问题中所说的初始状态是不是就是：甲醇  20%：乙酸铵80%啊？？

没必要每次梯度洗脱后让10-30倍的柱容积再生处理，我一般都把杂质冲洗掉后用初始态平衡几分钟

10-30倍的柱容积再生处理，没有实际做过这个样品，如果是所有样品做完结束清洗色谱柱还差不多，不然每走了针就要至少60min（梯度18min+再生40min) 了，回复到甲醇  20%：乙酸铵80%只要看基线平了，波动不影响峰的积分就行，此时可以进第二针了。

所以梯度一般最后都要回到原始态的。就可以解决你的问题了撒

谢谢！我就是想问下：从最后的状态 -- 甲醇98%，乙酸铵2% 一下子到初始状态 --  甲醇20%，乙酸铵80%，

乙酸铵会不会在甲醇中析出结晶，把色谱柱给堵了啊？

其实,醋酸铵的浓度很低,不会在甲醇 中结晶

1.乙酸铵是挥发性的缓冲盐，是液相色谱中首选的缓冲体系，对色谱柱影响较小；
2. 你那个乙酸铵水相缓冲体系应该是有一定浓度的吧。这个浓度也不算是高浓度了吧