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标题:【求助】我也要发新帖回帖 【求助】

u76mp[使用道具]
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发表于 2013-11-20 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】我也要发新帖回帖 【求助】


请问对双向电泳的结果进行质谱分析主要有哪些方法，各种方法的优缺点是什么，具体怎么操作？
还有各种方法分析一个蛋白点的价格是多少？在哪些公司能做？
问题有点大，不好意思，请高手详细指教，万分感谢！
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am10[使用道具]
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发表于 2013-11-20 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

双向电泳后，通过酶切将差异点蛋白提出来，送质谱分析。
主要用MALDI-TOF-MS
军科院仪器中心可以做。
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2013-11-20 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
复旦大学蛋白质组研究中心可以做。021－54237416
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2013-11-20 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有一个关键,就是你所进行的蛋白组相应的数据库要完整,简言之就是要有全基因的数据库,至少也要有一大半的基因数据库,不然很难检索到有用的信息....不然只能做氨基酸测序.相当麻烦.
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glass[使用道具]
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发表于 2013-11-20 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问对双向电泳的结果进行质谱分析主要有哪些方法，各种方法的优缺点是什么，具体怎么操作？
(答：2DE的结果一般接maldi-tof 或maldi-tof/tof 比较多，因为此类仪器灵敏，速度快，但单纯的maldi-tof 的PMF结果一般需要进一步的验证，比如ms/ms 的验证。所以，maldi-tof/tof 是一个比较好的选择。另外，2DE 的点也可以通过ESI源的仪器比如ESI-Q-TOF,LCQ ,LTQ等仪器。这些仪器的费用一般比较高，要较长的时间，但结果非常可靠。尤其是ESI-Q-TOF。LCQ,LTQ等仪器的准确度比q-tof 差。

maldi-tof/tof 一般800/spot ,ESI-Q-TOF,LCQ ,LTQ等，>1500元/spot但各个公司或学校的价格不太一样。
上海生物化学所，复旦大学，军科院，湖南师大都可以做。
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发表于 2013-11-20 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 glass 于 2013-11-20 16:13 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请问对双向电泳的结果进行质谱分析主要有哪些方法，各种方法的优缺点是什么，具体怎么操作？
(答：2DE的结果一般接maldi-tof 或maldi-tof/tof 比较多，因为此类仪器灵敏，速度快，但单纯的maldi-tof 的PMF结果一般需要进一步的验 ...

按照上面的分析，虽然ESI-Q-TOF的费用高，但其结果最可靠。尤其是相对MALDI-TOF/TOF来讲，不知道这样理解是否正确？？请多多指教。
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发表于 2013-11-20 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

ESI-Q-TOF的结果是非常可靠，但不一定就最可靠，FT, orbitrap这些质谱的可靠性也非常高。

ESI-Q-TOF的性能是很出众，MALDI-TOF/TOF也非常不错，不至于说ESI-Q-TOF就比MALDI-TOF/TOF优秀那么多。

应该说ESI-Q-TOF的可靠性，比ESI-Iontrap要高很多。

北京蛋白质组研究中心最近开始提供楼主需要的服务，由于刚开始做，价格相对比较便宜，建议楼主考虑一下
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发表于 2013-11-20 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

推荐一个地方,上海基康生物技术有限公司,专门从事生物技术服务的公司,服务态度没有问题,还可以替你保密.可以到他们的网站看看cuturl('WWW.GENECORE.COM')
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flower-201[使用道具]
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发表于 2013-11-20 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
忘了,他们的仪器是VOYAGER-DE-PRO,MALDI-TOF
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gemei0115[使用道具]
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发表于 2013-11-20 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1: MALDI-TOF
根据肽质量指纹图谱(Peptide Mass Fingerprinting, PMF)与蛋白质数据库中蛋白质的理论PMF比对，就可以鉴定该蛋白质。
优点：
速度快，通量高，方法简便。
缺点：
灵敏度不足，可检测到的肽段少，对数据库检索是不利的。
肽段分子量精确度往往不够理想，影响鉴定结果。肽段分子质量在2000以上时，在MALDI-TOF-MS中的分辨率会有所下降 。
蛋白质数据库仍不完善
2: ESI-MS/MS
由于MS/MS具有结构分析功能，可以获得检测到的每一肽段的序列。根据一级质谱(MS)测得的精确分子质量和串联质谱(MS/MS)所得的序列信息，通过蛋白质数据库的检索鉴定蛋白质种类。
优点：
通过串联质谱大大增加了蛋白质鉴定的准确性。
对图谱的精确度和分辨率要求不如PMF高。
采用纳升喷雾提高检测的灵敏度。
缺点：
通量与速度不如MALDI。
数据库检索比较费时。

可以到上海生化所蛋白质组分析中心做，那里起步比较早，还开发不少新技术，技术方面比较成熟，其网址：cuturl('www.proteomics.ac.cn')
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