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标题:【求助】较多样本的蛋白表达差异实验

Ao7[使用道具]
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发表于 2013-11-20 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】较多样本的蛋白表达差异实验


诸位大虾好：
小弟不才，目前，在设计日粮添加某种饲料对鼠钙代谢通路的关键分子表达差异这一实验。已有文献及本实验室的工作提示了5个已知蛋白分子可能与之有关。为此，拟进行用qRT-PCR探讨这几个蛋白在组织中的mRNA表达水平，准备完成后再进行组织中这几个蛋白表达水平上的检测。
小弟查了下相关文献及技术手册，Western blot自然是首选，免疫组化似乎定量效果不佳。但由于样品过多，近100个，按公司的报价，粗粗估计做5种蛋白的表达差异检测怎么也得9万。小弟认为似乎有些昂贵了，但由于相关知识欠缺，一筹莫展。
想请诸位大虾推荐，做100个组织样品，5个目的蛋白（已知）的差异检测，用什么方法较为合适，经费能控制在7，8万左右？2D电泳？itraq？IHC？Elisa？亦欢迎讨论。
谢谢！
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发表于 2013-11-20 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果可以做elisa,你可以去查一下luminex技术，感觉很适合你。
这么多样品用western定量问题会比较多
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2013-11-20 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个首先要看您的样本量是怎么设置的，是按照给药浓度去设置吗？可以选择正交设计或者均匀设计去减少样本量。
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发表于 2013-11-20 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

7-8万的话 才100个样本
抽RNA 做real time 就ok了
taqman探针都可以用了
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发表于 2013-11-20 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
7，8万做完100个样品，5个蛋白的WB检测完全能盖得住
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发表于 2013-11-20 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果可以做elisa,你可以去查一下luminex技术，感觉很适合你。
这么多样品用western定量问题会比较多

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谢谢您，不知这种技术能否用于检测组织中的蛋白，价格怎么样？养细胞的话，似乎小弟实验室的条件不足。
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发表于 2013-11-20 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个首先要看您的样本量是怎么设置的，是按照给药浓度去设置吗？可以选择正交设计或者均匀设计去减少样本量。

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是的，您说的对。实际上，我们已经优化了样本数量。谢谢您的回复！
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Ao7[使用道具]
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发表于 2013-11-20 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
7-8万的话 才100个样本
抽RNA 做real time 就ok了
taqman探针都可以用了

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恩。您说的对，实际上，小弟也是拟使用荧光定量，先行对其进行表达水平的检测。
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发表于 2013-11-20 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
7，8万做完100个样品，5个蛋白的WB检测完全能盖得住

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这些是包括了一，二抗的钱吗？
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 小中大
谢谢您，不知这种技术能否用于检测组织中的蛋白，价格怎么样？养细胞的话，似乎小弟实验室的条件不足。

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可以检测组织中的蛋白，原理和elisa差不多。只不过抗体是固化在不同微珠上的，在一个管子里检测多个蛋白。
如果有现成的试剂盒，价格会比较便宜，很多公司都有基于luminex技术的试剂盒，像 biorad、Merck等等，有些可以自己随意组合的。没有试剂盒，也可以自己包被抗体，也用公司提供相关技术服务。具体你可以去查一下。
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