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标题:【求助】蛋白样品在室温放了6小时会降解吗？

#甜#[使用道具]
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发表于 2013-11-20 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白样品在室温放了6小时会降解吗？


我把细胞提得蛋白样品丢在室温中6小时左右，不知道会不会降解？有什么办法可以快速检测？
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koook5695[使用道具]
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发表于 2013-11-20 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 #甜# 于 2013-11-20 16:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我把细胞提得蛋白样品丢在室温中6小时左右，不知道会不会降解？有什么办法可以快速检测？

根据我的经验：对于不同的蛋白，其是否容易降解的程度不一样。一般的，分子量大的，容易降解。你可以对目的蛋白做个Western检测，看其是否有降解。
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发表于 2013-11-20 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般不会降解
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发表于 2013-11-20 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不同的蛋白差异很大，降解速度也不同，同一种蛋白里不同的分子量大小降解速度也不同，不知是否加了蛋白酶抑制剂，细胞裂解液一般可加入如PMSF 等蛋白酶抑制剂，且一般要放在低温，最好负80度。

不知是否要作WB，如没有蛋白酶抑制剂，如做WB，可将蛋白定量后用上样缓冲液稀释然后变性，这样在常温下降解较少，另为确定蛋白降解的程度及具体哪些蛋白降解，可先跑PAGE，染下看看。
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发表于 2013-11-20 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位，我的蛋白是已经加了裂解液包括蛋白酶抑制剂的，本来是保存在液氮口的，准备作WB，后来取细胞时忘了放回去，就吊在外面，6小时后才发现。我的目标蛋白分子量在50－60左右。今天跑了一下，还转了膜，丽春红染色后和以前差不多，不知道是不是就没有完全降解了？杂一抗还有没有意义？
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发表于 2013-11-20 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果室温放了一天一夜呢？包含体15KD左右。
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发表于 2013-11-20 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位，我的蛋白是已经加了裂解液包括蛋白酶抑制剂的，本来是保存在液氮口的，准备作WB，后来取细胞时忘了放回去，就吊在外面，6小时后才发现。我的目标蛋白分子量在50－60左右。今天跑了一下，还转了膜，丽春红染色后和以前差不多，不知道是不是就没有完全降解了？杂一抗还有没有意义？

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问题不大
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#甜#[使用道具]
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发表于 2013-11-20 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

虽然立春红染过后有条带，可是片压出来什么都没有？按以前摸索过的条件，就是说除了蛋白样品其他的都没有改变。那是不是说蛋白降解了？
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 小中大
我把细胞提得蛋白样品丢在室温中6小时左右，不知道会不会降解？有什么办法可以快速检测？

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你可以用考马斯亮蓝染下色看看。就知道有没有降解
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发表于 2013-11-20 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 3648755 于 2013-11-20 16:32 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我把细胞提得蛋白样品丢在室温中6小时左右，不知道会不会降解？有什么办法可以快速检测？

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你可以用考马斯亮蓝染下色看看。就知道有没有降解 ...

请问一下如何用考马斯亮蓝染色就可以确定的呀
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