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标题:【求助】蛋白提取液与上样缓冲液一起100℃煮沸，暴沸...

火树银花nm[使用道具]
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发表于 2013-11-21 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白提取液与上样缓冲液一起100℃煮沸，暴沸...


诸位，蛋白提取液与上样缓冲液一起100℃煮沸时，暴沸，Ep管的盖子都崩开了，大家遇到过吗？怎么办？把Ep管敞开口煮沸吗？
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2013-11-21 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以敞开来煮的，不过蛋白提取液和上样缓冲液的总体积要多一点，煮沸10分钟就可以了
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火树银花nm[使用道具]
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发表于 2013-11-21 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢！你们一直都是敞开来煮吗？
敞开来煮没有蒸发吗？蛋白浓度不就会变吗，和定量时的蛋白浓度有差别了？如果是同一批蛋白样品，同时处理好像问题不大，不同批次之间不就有问题了？
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2013-11-21 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我平时样品处理是按照这个体系来做的，5ul蛋白样品+5ul的5x上样缓冲液+15ul的缓冲液（与蛋白样品的缓冲体系一样）即25ul的体系，等水煮沸后将样品放入加热10分钟即可，在整个煮的过程中是盖着盖子的。我试过了没有喷开，对了还有一个小小的提示，就是不要把EP管完全插到泡沫板上，盖子端离泡沫板表面留一点距离，也可以防止盖子喷开，不过水要保证足够，我知道的也就这么多了，希望能帮到你。
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发表于 2013-11-21 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

给个我的方法给你参考
在塑料泡沫上面挖几个和EP管一样的洞洞，然后将蛋白样品和上样缓冲液混起放到EP管里面，盖上盖子煮沸10min 就可以了，不会爆炸的，我每次都试这个方法的
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发表于 2013-11-21 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢！
我平时采用的方法基本也是如此，蛋白样品和上样缓冲液每管中有200ul，偶尔就是有把盖子冲开的。昨天我还特意加了封口胶，盖子开了，但液体好像没有少。谢谢交流！
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发表于 2013-11-21 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
打洞呀。

用注射器的针头在酒精灯上烧红，然后打洞呀。

塑料会融化的
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发表于 2013-11-21 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以用PCR仪的预热
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2013-11-21 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的蛋白从来都没有这种情况，因为管里的液体本身就很少，但是如果煮别的话我的处理方法是在旁边看着，过个5分钟拿出来打开一下。笨法，大家切莫见笑，觉得比较保险，又不会损失样品。
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49888[使用道具]
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发表于 2013-11-21 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用封口膜封上就好了，然后等水煮沸以后，把小管插到塑料泡沫上，不要完全插进去，留一段距离，扔到水里就行了
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