小中大回复 #3 mybioon 的帖子
不知道兄弟注意没有,(1)pET32a质粒上游就有Histag标签,就在多克隆位点的上游,介于Trx蛋白和多克隆位点之间,即使你的目的基因上有终止密码,蛋白翻译时也确实终止了,只是多克隆位点下游的Histag标签不会翻译,而上游的Histag标签也会翻译出来。因此,过柱时也会挂在Ni柱上啊。(2)过柱时不仅有Histag标签的蛋白可以结合Ni柱,其实很多杂蛋白也可以结合在Ni柱上,这就是为啥在做蛋白纯化时要模咪唑浓度的原因,但是一般的杂蛋白和Histag标签蛋白的结合能力不一样,因此可通过不同咪唑洗脱达到分离纯化蛋白的目的。(3)即使出现了你说的那种情况,我仔细看了下pET32a的图谱,如果通读了的话,最多比不通读时多20个左右的氨基酸,这在做PAGE时是不易区别出来的。个人见解,仅供参考,望多交流。