小中大以前做过亲和层析,感觉亲和层析虽然得到的产品纯,但这个纯是以产率低做为代价的。对于一般的研究用蛋白纯化还好,如果用于生产就太贵了。而且普遍来说,亲和层析的上样时间长,流速慢,不宜于大规模蛋白提纯。
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亲和层析确实只能适用于研究,做产业可能够呛。主要的原因是上样时间长,流速慢;
但产率低我到没有觉得,亲和层析的结合是很牢固的,我认为产量低的原因可能是表达量本身低。目的蛋白在上样液中的绝对含量少所致。不过满足试验研究用还是够用,大规模生产当然不行。
上样时间长,流速慢的问题可以考虑在上样前先浓缩一下,减少上样量。流速最好不要太快,快了影响得率。
目前用于生产的可能还是原核表达,用发酵罐来整。refolding可能有助于其表达蛋白活性的恢复,但真核表达的优势除了蛋白能有效折叠外,还能对蛋白糖基化。原核蛋白如何糖基化?记得CP中有过介绍。
亲和层析中开始液和洗脱液的选择很重要,如果不合适,会影响得率和蛋白活性。虽然有些手册有介绍,不知大家有何高见?