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标题:【求助】关于蛋白定量向大家求助

changlhsyo[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于蛋白定量向大家求助

大家好
我想检测大鼠脊髓中某种神经营养因子的具体含量（如含有多少微升），用哪种方法可以测定啊？western可以吗？
多谢大家了
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vcve[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵，western最多是半定量，而且问一句，你有这种营养因子的标准品么？否则你的定量从何谈起。
其实，如果想定量，可以考虑RTPCT，间接的通过mRNA来考虑。
如果，你们手头有足够的质谱机时，你老板又足够有钱，可以做标记，可以考虑质谱定量，不过也不是完全准确，但是比western好点，最好是结合western的结果一起说。（这个问题是质谱本身的原理导致的，很难解决）
对于蛋白质的绝对定量，目前没有很完美的办法，但是相对定量用western，质谱，甚至色谱纯化都可以做到（前体是你有这个蛋白的标准品）。
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发表于 2013-11-24 00:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你是指脊髓液中神经营养因子的含量吗？你可以用ELISA的方法进行定量；如果是脊髓组织中，只能用westen的方法了；不过从你的题目中看到--“如含多少微升”没有明白，一般的单位应该是xx ug/ml或者更低 xx ng/ml；用ELISA作一个标准曲线，再计算样本的含量；
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changlhsyo[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼上两位
我对实验技术不太懂
让各位见笑了

我是想测量脊髓组织中的某种神经营养因子蛋白含量，
western的话怎么通过灰度来计算到含量呢？
会不会比ng还小呢
多谢
再次请教
您的帮助会让我少走很多弯路
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changlhsyo[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
另外想问
神经营养因子没有标准品吗？
如bdnf 或gdnf
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vcve[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 changlhsyo 于 2013-11-24 00:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
另外想问
神经营养因子没有标准品吗？
如bdnf 或gdnf

标准品肯定是有的，你在CST or santa cruz公司查下。
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发表于 2013-11-24 00:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 changlhsyo 于 2013-11-24 00:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

谢谢楼上两位
我对实验技术不太懂
让各位见笑了

我是想测量脊髓组织中的某种神经营养因子蛋白含量，
western的话怎么通过灰度来计算到含量呢？
会不会比ng还小呢
多谢
再次请教
您的帮助会让我少走很多弯路 ...

单纯地检测组织中的神经营养因子的含量没有太大意义；

western一般会用于检测蛋白水平的变化情况，以及某种修饰的变化情况；你要明白如果仅仅是检测单组织中的含量有什么意义呢？难道你要和标准品的灰度值相比吗？如果它在你的处理中没有变化或者没有参与你的某种处理过程，是没意义的；

至于是多少量，这个就更难说清楚，谁知道是多少ng或者更高或更低，你要查文献才知道；

总体感觉你没有明确的实验设计方案与思路，与你所掌握的背景知识少有很大关系，想小走弯路的最有效的办法是读文献；
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changlhsyo[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 vcve 于 2013-11-24 00:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


单纯地检测组织中的神经营养因子的含量没有太大意义；

western一般会用于检测蛋白水平的变化情况，以及某种修饰的变化情况；你要明白如果仅仅是检测单组织中的含量有什么意义呢？难道你要和标准品的灰度值相比吗？如果它在 ...

谢谢你的热心指教，我查文献也没有看到有测量神经营养因子在组织中的具体含量的，但是我的实验里就是想知道他的具体含量，想根据某种状态下的组织内神经营养因子含量决定外源给予的量。
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changlhsyo[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

外源性加入的神经营养因子的量与药物的活性，与受体的结合能力有关；一般情况下可能要用到uM级别；

印象中IGF-I的使用量是10ng/ml，在原代神经元的培养中的加入量；与细胞类型也有一定的关系。不知是否适合的研究需要。
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changlhsyo[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢
我的想法就是:在机体自身能够“代偿”时测定组织内的某种神经营养因子的含量，
然后在机体某种病态时不能自身代偿，所以我想看能不能将这种测得的含量给予不能代偿的机体
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