蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】蛋白表达量太低，咋办？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 22  1/3 123››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】蛋白表达量太低，咋办？

北国毛毛雪[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108871
精华 0
积分 187
帖子 114
信誉分 100
可用分 1141
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
1

发表于 2013-11-24 00:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白表达量太低，咋办？


各位做过原核表达的朋友，我用的是PGEX4T-2作载体，转化DH5a菌。37度诱导表达量不高，查过资料后用25度、42度，反正改变温度反而不表达了。我是测过序的，保证读码框架正确。请高手快快不吝赐教，我快急疯了！
顶部
biabiade[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76440
精华 0
积分 388
帖子 435
信誉分 100
可用分 3036
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
2

发表于 2013-11-24 00:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

膜蛋白？
顶部
PPT[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75223
精华 0
积分 248
帖子 195
信誉分 100
可用分 1776
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
3

发表于 2013-11-24 00:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PGEX宿主菌应该都是BL21吧？
顶部
jiushikeshui371[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108894
精华 1
积分 312
帖子 299
信誉分 102
可用分 2258
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
4

发表于 2013-11-24 00:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
GST载体再DH5 a 表达也可以，但是通过优化条件提高产量，几乎都会失败，建议采取大量培养的方法来解决。
顶部
北国毛毛雪[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108871
精华 0
积分 187
帖子 114
信誉分 100
可用分 1141
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
5

发表于 2013-11-24 00:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位，我表达的是一种细胞因子的嵌合蛋白，并非膜蛋白，单独表达细胞因子是时用的相同的载体和宿主菌，表达的不错，谁知Linker上一段短肽后表达的这么让我伤心。
顶部
北国毛毛雪[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108871
精华 0
积分 187
帖子 114
信誉分 100
可用分 1141
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
6

发表于 2013-11-24 00:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你是说大体积诱导，用柱子浓缩吗？
顶部
tudou85[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77498
精华 0
积分 394
帖子 468
信誉分 100
可用分 3171
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
7

发表于 2013-11-24 00:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议换成BL21作宿主菌试试。
据说有时原核表达需要不断的试各种宿主菌和不同的克隆。不同的克隆表达尚且会有不同，更不用说你还Linker上一段短肽了。
祝好运!
顶部
北国毛毛雪[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108871
精华 0
积分 187
帖子 114
信誉分 100
可用分 1141
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
8

发表于 2013-11-24 00:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢，我觉得也好换宿主菌了，每个实验室都有自己的传统，我们实验室一直以来都用pGEX4T-2做表达载体，DH5a作宿主菌，就没尝试过其他的载体和细菌，早就听说PET/BL21系列不错了。还想问一下，含有重组质粒的BL21是不是不好做甘油管保存？
顶部
coolcool[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72942
精华 0
积分 264
帖子 227
信誉分 100
可用分 1941
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
9

发表于 2013-11-24 00:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

pGEX用BL21保存很容易丢失，表达的时候转化BL21。
顶部
莓菓333[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73290
精华 0
积分 183
帖子 106
信誉分 100
可用分 1296
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-21
状态 离线
10

发表于 2013-11-24 00:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Linker上一段短肽，具体一下可以？
短肽如在C端，且疏水，一般蛋白表达量低。
顶部
 22  1/3 123››