【求助】P-ERK1/2--western blot的条件

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标题:【求助】P-ERK1/2--western blot的条件

viviwang1987[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教各位大侠：我最近在做P44/42-ERK，分子量如此接近，怎样才能把两条目的条带分开？分离胶的浓度如何？我用的是湿转，电泳，转膜条件应该怎样？非常感谢！

2541[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

12％的胶恒压100V跑。
湿转恒流300ma转40min（六一电泳设备）。
下面是我们的抗体检测结果图(详见 cuturl('http://www.zkbiotech.com/products_show.asp?id=135'))

附件

2013-11-24 00:55

30616770.jpg (1.33 KB)

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发表于 2013-11-24 00:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果是半干转bio-rad的不超过２５Ｖ的，ＥＲＫ的转膜条件是什么？

wiwi[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

12％的胶恒压100V跑。
湿转恒流300ma转40min（六一电泳设备）。
下面是我们的抗体检测结果图(详见 cuturl('http://www.zkbiotech.com/products_show.asp?id=135'))

===============================================================================================================

看你的结果真漂亮，我也作这个蛋白，我用的是湿转，BIO-RAD,用恒亚110，2小时，结果不是太好，我的转膜时间是不是太长？谢谢！

nn255[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1回楼主，这个不要担心跑不开，跑12％，10％胶，跑到酚绣蓝即将出来的时候，都是可以跑开的：）
2如果是半干转bio-rad的不超过２５Ｖ的，推荐使用20V,15-20MIN都是没有问题的，干转的效率很高，您可以放心
3如果是同一品牌的湿转，我的条件是用横流跑的能出来很漂亮的带，而你这个电压再用这个时间，确实是有点转过了，呵呵

qqq111[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 nn255 于 2013-11-24 00:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

1回楼主，这个不要担心跑不开，跑12％，10％胶，跑到酚绣蓝即将出来的时候，都是可以跑开的：）
2如果是半干转bio-rad的不超过２５Ｖ的，推荐使用20V,15-20MIN都是没有问题的，干转的效率很高，您可以放心
3如果是同一品牌的湿转，我的条件是用横流 ...

请问：我如果考虑用恒流的话，应该多少大的电流，多长时间？谢谢！

nn255[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的是100MA,3个小时，呵呵

sunnyB[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用10%的胶,CST抗体(小鼠单克隆的),电泳时候先用80V,后130V,跑到溴芬兰跑出去时,停止电泳,图象很漂亮的,可惜今天照片没在身边.

ending[使用道具]
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发表于 2013-11-24 00:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 2541 于 2013-11-24 00:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
12％的胶恒压100V跑。
湿转恒流300ma转40min（六一电泳设备）。
下面是我们的抗体检测结果图(详见 cuturl('http://www.zkbiotech.com/products_show.asp?id=135'))

做ERK很久了，别的没什么意见，只是你的片子上下反过来了，ERK下面的条带比上面粗，不要误导新人。