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标题:【求助】做WESTERN时，蛋白浓度已经知...

89tongzijun[使用道具]
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发表于 2013-11-24 11:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】做WESTERN时，蛋白浓度已经知...


我是新手 才开始做WB

最近提了蛋白 用BCA法定量 提了两组蛋白 一组是3.22ug/ul，另一组是2.44ug/ul

我看了很多帖子说要 把浓度调为等浓度的

那么我应该怎么调呢~谢谢 各位老师了~~
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vtongli[使用道具]
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发表于 2013-11-24 11:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
把3.22的浓度调整成2.44，然后上样量保证一样即可！
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birdfish[使用道具]
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发表于 2013-11-24 11:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
把3.22的浓度调整成2.44，然后上样量保证一样即可！具体公式：假设你现在体积是A，那么：（A+X)*2.44=A*3.22，X就是要加入的体积！
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发表于 2013-11-24 11:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有就是 将浓度调为一致的后 要上样本的体积是应该一样么？不足的以双蒸水补足哇？
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birdfish[使用道具]
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发表于 2013-11-24 11:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 89tongzijun 于 2013-11-24 11:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
还有就是 将浓度调为一致的后 要上样本的体积是应该一样么？不足的以双蒸水补足哇？

浓度一样，上样量体积一样，其中所含蛋白不就一样吗？
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30moonriver[使用道具]
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发表于 2013-11-24 11:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用裂解液稀释成一样的浓度啊……等量上样
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bluelake[使用道具]
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发表于 2013-11-24 11:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

浓度不用调，上一样的蛋白总量就好，如都上35ug
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89tongzijun[使用道具]
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发表于 2013-11-24 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 bluelake 于 2013-11-24 11:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

浓度不用调，上一样的蛋白总量就好，如都上35ug

我迷茫了~~

我的是小鼠的肺组织~

你意思是体积不用一样 高浓度的多加裂解液么
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damingxia0904[使用道具]
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发表于 2013-11-24 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
浓度不用调，上一样的蛋白总量就好，如都上35ug

===============================================================================================================

对，不用调浓度，上样的总蛋白量一样就好。具体上样量还要看你杂什么蛋白，一般看家基因的20-40 ng 就差不多了，为了节省蛋白和准确性，你可以先试试上20或者25 ng。因为标样蛋白跟目的蛋白的空间结构不一样，所以BCA测可能有误差，先根据BCA浓度做个预杂交看看条带怎么样，如果明显不一致，最好找个WB高手帮忙微调一下。看家基因的蛋白调一致了，再根据要杂的目的蛋白的情况翻倍上样，一般翻一倍吧，难杂的就要再摸索一下了。
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damingxia0904[使用道具]
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发表于 2013-11-24 11:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 damingxia0904 于 2013-11-24 11:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
浓度不用调，上一样的蛋白总量就好，如都上35ug

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对，不用调浓度，上样的总蛋白量一样就好。具体上样 ...

不好意，"ug"写成了"ng"
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