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实验具体是这样的
1.封闭采用的脱脂奶粉,封闭时用含5%脱脂奶粉的PBST
2.抗体是我新订购的,abcam公司的单抗,货号为ab47455,1:500、1:1000都做过没处
3.我把蛋白最多一次上了36微升,内参已经足有三毫米宽了,目的蛋白还是什么也没有
4.蛋白抽提采用的是普利来公司的总蛋白抽提试剂盒,在提取过程中添加了PMSF
5.转膜时采用的是预染maker,且做了丽春红染色,能看到膜上有蛋白
abcam的抗体三千多,如果换抗体又得两千多,但我觉得这么大的公司,不应该在抗体上出现问题啊,自己推断可能是蛋白抽提的问题,可是内参出啊,抽提应该没问题啊,晕了,也要死了,今天一下午丝毫力气都没有了…………大家帮忙了!!!