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标题:【求助】SDS-PAGE电泳的还原和非还原

rxcc33[使用道具]
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发表于 2013-11-26 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE电泳的还原和非还原


问大家一个很菜的问题，SDS-PAGE还原和非还原电泳跑出的胶主要区别是什么？加不加2-巯基乙醇有怎样的影响？2-巯基乙醇不是现用现加是不是影响电泳的效果？
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2013-11-26 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

问大家一个很菜的问题，SDS-PAGE还原和非还原电泳跑出的胶主要区别是什么？加不加2-巯基乙醇有怎样的影响？2-巯基乙醇不是现用现加是不是影响电泳的效果？
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发表于 2013-11-26 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还原是加巯基乙醇的非还原是不加巯基乙醇，巯基乙醇是一种强还原剂，它可以是半胱氨酸残基之间的二硫键断裂，换句话说跑非还原的更能看出蛋白质的原始状态。巯基乙醇可以加到你的样品缓冲液里。
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发表于 2013-11-26 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 rxcc33 于 2013-11-26 16:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

问大家一个很菜的问题，SDS-PAGE还原和非还原电泳跑出的胶主要区别是什么？加不加2-巯基乙醇有怎样的影响？2-巯基乙醇不是现用现加是不是影响电泳的效果？ ...

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问大家一个很菜的问题，SDS-PAGE还原和非还原电泳跑出的胶主要区别是什么？加不加2-巯基乙醇有怎样的影响？2-巯基乙醇不是现用现加是不是影响电泳的效果？

如果你是跑的SDS的话，你就必须加2-巯基乙醇，不然的话变性的蛋白会复性，你所做的就不是SDS变性电泳了，有可能在一定程度上变成native电泳。
2-巯基乙醇不现用现加没有影响，不过要保证2-巯基乙醇的量够用。
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2013-11-26 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢大家的讨论参与。我就是怕2-巯基乙醇挥发掉了，影响电泳结果。大家有没有发生2-巯基乙醇挥发影响电泳结果的事情？
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发表于 2013-11-26 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
书上和蛋白Marker说明书上都说2-巯基乙醇要现用现加，但我们一般在配上样buffer时就加了，电泳效果还不错，不过配好的上样buffer每次用完后要放4度冰箱中！避免2-巯基乙醇的挥发。
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发表于 2013-11-26 16:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
"如果你是跑的SDS的话，你就必须加2-巯基乙醇"
就是说不存在跑非还原SDS-PAGE电泳?
native SDS-PAGE与非还原SDS-PAGE在应用上的区别到底在哪里?
谢谢!这个问题我迷惑很久了!
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发表于 2013-11-26 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
"如果你是跑的SDS的话，你就必须加2-巯基乙醇"
就是说不存在跑非还原SDS-PAGE电泳?
native SDS-PAGE与非还原SDS-PAGE在应用上的区别到底在哪里?
谢谢!这个问题我迷惑很久了!

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应该没有native SDS-PAGE这种说法，一般的蛋白电泳只有两种：PAGE和SDS-PAGE，PAGE是native ，SDS-PAGE是denature的。
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-11-26 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

native-PAGE与SDS-PAGE在应用上的区别:
1、native-PAGE后可用切胶、电洗脱等方法回收到有一定生物活性的目的蛋白，蛋白二聚体或多聚体的分析也可用它；
2、SDS-PAGE胶上回收的目的蛋白可用于免疫动物制备抗体。
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2013-11-26 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

tussah,是我写错了,多了个SDS
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