【求助】请教Westernblot条带中间细（甚至空）...

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标题:【求助】请教Westernblot条带中间细（甚至空）...

kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-11-26 21:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教Westernblot条带中间细（甚至空），而两头粗的原因可能有哪些？谢谢

大致

条件：

电泳：200v

电转：半干，15v，30min

1st Ab: overnight

2nd Ab: 1h,RT

Development: ECL, 3min

附件

2013-11-26 21:46

39133690.jpg (38.96 KB)

zhezhe[使用道具]
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发表于 2013-11-26 21:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可能是你加的样有杂质

BUK[使用道具]
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发表于 2013-11-26 21:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

就是比如细胞裂解液裂解后，加了buffer煮，煮完没离心活离心不干净。样加到孔里杂质一般掉中间，电泳时候中间就没了啊，我猜

kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-11-26 21:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢回复。但是我觉得这个原因有点牵强。

分子式[使用道具]
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发表于 2013-11-26 21:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

上样量是不是比较多？降低上样量看看呢。

kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-11-26 21:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 分子式 于 2013-11-26 21:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
上样量是不是比较多？降低上样量看看呢。

10ug（about10ul） sample, 应该不多啊

fqswdzd[使用道具]
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发表于 2013-11-26 21:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白不均一，上样前用涡旋仪混下试试看。

kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-11-26 21:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 fqswdzd 于 2013-11-26 21:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
蛋白不均一，上样前用涡旋仪混下试试看。

有vortex before loading sample啊，这个应该也不是问题的。

huifeng0516[使用道具]
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发表于 2013-11-26 21:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的maker也是这样哑铃状的吧？那就是胶配的有问题，不是配方有问题，而是你制版没夹好，凝的时候没凝好

kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-11-26 21:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 huifeng0516 于 2013-11-26 21:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你的maker也是这样哑铃状的吧？那就是胶配的有问题，不是配方有问题，而是你制版没夹好，凝的时候没凝好

Thanks so much.

Development的时候marker没有显示。但是在transfer以后，marker还是很正常的。不过你说的这个可能性还是有的，只是做的时候又不漏胶，如何预先知道配胶有问题啊？

我一般把gel的recipe全部加完后，再vortex几下，应该也是均匀了的，隔个半分钟让bubble减少一点，然后用1ml的tips加resolving gel，一般加个7.5ml, 再用95% ethanol封胶，这个过程有哪里不妥的地方吗？

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