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标题:【求助】大肠杆菌重组蛋白去除内毒素

惊醒ing[使用道具]
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发表于 2013-11-27 14:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】大肠杆菌重组蛋白去除内毒素


大家好，我想将重组蛋白进行去内毒素处理，但是因为以前没做过，对可以采用的方法和具体的操作都不清楚，我找了一些方法，但是不知道到底应该用哪种，具体怎么做，希望各位战友多多指导，期待大家的回复，谢谢
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发表于 2013-11-27 14:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

过阴离子柱或用去内毒素亲和填料。
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发表于 2013-11-27 14:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上正解，层析去热原。

还要注意的是最好每步都控制热原引入，最后控制在一定范围内。
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2013-11-27 14:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上正解，如果做的不是很理想，可以联系我，杭州纽龙生物有限公司，18057157078.QQ479080179.袁俊涛
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发表于 2013-11-27 14:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

内毒素除掉没有？如果内毒素和蛋白质结合，如果用层析的方法一般不能让内毒素含量达到药典的标准。
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发表于 2013-11-27 14:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

20339
Detoxi-Gel Endotoxin Removing Gel

Formulation: Polymixin B on crosslinked 6% beaded agarose slurried in 25% ethyl alcohol
Sufficient For: Binding approx. 10,000 endotoxin units of LPS per mL of resin per use
使用商业化的kit，如果不是生产，绰绰有余喽
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发表于 2013-11-27 14:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
过阴离子柱或用去内毒素亲和填料。

===================================================================================

能说具体点吗 那个阴离子柱的材料是什么的 在哪可以查到 我才刚刚接触这些东西 还不是太熟 能具体点吗
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发表于 2013-11-27 14:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我之前专门花了几天的时间查找阅读关于怎么去除内毒素的文献，最后的结论是用Triton X-114最好，简单处理可去除绝大部分的内毒素，具体方法如下：

1、在蛋白样品中加入终浓度1-2% （W/V）的Triton X-114，涡旋振荡后置于冰浴中5-15min，期间最好多次混匀样品。

2、在50-75度的水浴中孵育样品1-5min，如果蛋白不稳定，可在37度水浴中孵育5-10min，使Trion X-114与水溶液分离。
3、在恒温30度左右的转子中离心，12000g 1min，使Trion X-114与水溶液分离。取上清。
如果你的样品是soluble的，那蛋白的回收率大概95%左右，上清中大概有0.04% 的Triton X-114残留。我用这个办法处理过几个蛋白，用于免疫的，效果很好的。
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发表于 2013-11-27 14:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 mysmdbl 于 2013-11-27 14:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我之前专门花了几天的时间查找阅读关于怎么去除内毒素的文献，最后的结论是用Triton X-114最好，简单处理可去除绝大部分的内毒素，具体方法如下：

1、在蛋白样品中加入终浓度1-2% （W/V）的Triton X-114，涡旋振荡后置于冰浴中5- ...

你好 非常感谢，可否告诉我一些相关的文献，可以让我看一下，还有就是Trion-X在哪能买到，大约价格是多少，怎么确定残留的蛋白不会影响实验
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68943512yao[使用道具]
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发表于 2013-11-27 14:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我之前专门花了几天的时间查找阅读关于怎么去除内毒素的文献，最后的结论是用Triton X-114最好，简单处理可去除绝大部分的内毒素，具体方法如下：

1、在蛋白样品中加入终浓度1-2% （W/V）的Triton X-114，涡旋振荡后置于冰浴中5-15min，期间最好多次混匀样品。

2、在50-75度的水浴中孵育样品1-5min，如果蛋白不稳定，可在37度水浴中孵育5-10min，使Trion X-114与水溶液分离。
3、在恒温30度左右的转子中离心，12000g 1min，使Trion X-114与水溶液分离。取上清。
如果你的样品是soluble的，那蛋白的回收率大概95%左右，上清中大概有0.04% 的Triton X-114残留。我用这个办法处理过几个蛋白，用于免疫的，效果很好的

您好，我想问一下，您说的这个离心用的什么离心管，因为我们常用的离心管是塑料的，也有热源污染的，而一般玻璃的用12000g进行离心的话，肯定承受不了这么大的压力？
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