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标题:【讨论帖】蛋白复性

zsxan1990[使用道具]
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【讨论帖】蛋白复性

大家可以自己尝试,8M的尿素你扔到-18度的冰箱里面看看会有什么结果就行了。
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zsxan1990[使用道具]
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低温,安静,平滑的变性盐下降,加上电场约束,复性还需要什么?希望大家提供宝贵意见,进一步改进这台仪器。


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2013-11-27 15:49
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zsxan1990[使用道具]
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电泳图,可能是浓度问题吧!标准BSA跑的有点慢。


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zsxan1990[使用道具]
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这个设备下游设想再直接连接色谱柱在相对低温下(猜想柱料在低温下应该结合能力更强大一些)进行纯化甚至是进一步复性,不过目前还真没这个能力做。迫切希望大家给提各种意见!非常感谢!
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zsxan1990[使用道具]
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自己帖,自己顶!很无奈哦!不过谈点对复性的理解:人类的各种工具目前看来肯定的说是无法进入分子内部去调整原子的空间位置,所以留给我们的想象空间不过是创造复性最合适的环境而已。从热力学角度上说,低温状态下更适合蛋白的天然构像。而天然构像的所有信息都是存在于蛋白的一级结构中的。变性剂不过是个中介而已,高浓度时让肽链舒展,浓度逐渐降低时,一级结构里面存在的折叠信息(促进正确折叠的决定因素)逐渐指导分子正确折叠。这个过程中分子之间的缠绕是最大的阻碍。色谱不过是用柱料吸附阻止缠绕而已…………
还是希望战友们不吝提供各种意见!!至少别让这个帖子沉了!!
非常感谢!!
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966735obeng[使用道具]
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本来认为冷冻复性是我发现的呢!没想到和清华的刘教授交流之后,据他说有国内外有几个小组都做过这方面的研究。我在ncbi上没有查到这方面的文献,不知道是什么原因。

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记得以前我的导师说过一句话,当年我也是有一个自己很得意的想法(关于一种有机合成实验副产物的回收),也是没有见过文献报道。他当时奉劝我不要耗费太多精力,他说:其实聪明人很多,一般你能想到的肯定也会有别人想到,但是为什么没有文献报道呢?原因只有两种可能:1.这么做成本太高,虽然路线通了,但是没有实际操作价值,尽限理论研究而已;2.难度太大,试过的人也就退缩没有下文了。楼主的思路估计属于后者。

不是给楼主泼冷水,而是希望楼主能坚持下去。我们肯定会一直关注的
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zsxan1990[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 966735obeng 于 2013-11-27 15:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
本来认为冷冻复性是我发现的呢!没想到和清华的刘教授交流之后,据他说有国内外有几个小组都做过这方面的研究。我在ncbi上没有查到这方面的文献,不知道是什么原因。

================================================== ...

我做成功过的,没有什么难度呀!还好有人顶贴了!谢谢!
不过恕我抬杠,难道搞科研的总要跟在别人屁股后面跑吗?天下人都比我们聪明吗??
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zsxan1990[使用道具]
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我的导师直后悔自己退休了,他要资助研发,我实在不好意思动用恩师的钱才在这里找合作的。从另外一个角度我给战友们提个观点吧!我们的师长辈多半来自窘迫的研发环境,对钱看的比灵感高的多,没有十拿九稳的把握不会动手的,所以跟随的意念深重。科研求稳很合理,不过也该有前行的意识。此一时,彼一时吧!举个例子,PCR不过就是3个水浴锅做的实验吗?很多情况下科技就是一张挡在眼前的纸!!
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7437654[使用道具]
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嗯,支持楼主!
要是搞成功作出产品的话,肯定热卖!!!
不过我有一个问题,不知道你说的电场是怎么回事,
要是在蛋白溶液里加电场的话,你的缓冲液pH不能与等电点相同,不然蛋白很可能会沉淀的。但若不为等电点,蛋白肯定会带电荷,这样不就与电泳像似了吗?蛋白会向某一电极聚集,使局部浓度增加,会不会增加分子间的缠绕呢?

请指教,谢谢
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zsxan1990[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 7437654 于 2013-11-27 15:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
嗯,支持楼主!
要是搞成功作出产品的话,肯定热卖!!!
不过我有一个问题,不知道你说的电场是怎么回事,
要是在蛋白溶液里加电场的话,你的缓冲液pH不能与等电点相同,不然蛋白很可能会沉淀的。但若不为等电点,蛋白肯定会带电荷,这样不 ...

溶液内局部浓度过高的问题也考虑了,分子之间不会无限接近的,毕竟还会有些斥力在起作用。等电点是个问题,目前我的实验是故意忽略这个问题的,就是8.2的溶液,so far,so good. 以后做产品的话肯定得细抠。现在在里面加上了甘油使溶液粘滞一些,何况仅只是加上了一个电场,并没有实际的电流通过溶液,所以考虑忽略电泳还应该是合理的。实在不行就定时翻转一下电场方向就是了。这样回答您能否满意!!
而且一定频率脉冲的电场估计还有一个好处,就是能破坏那些较弱的错误分子内作用力,就像工地上用振荡器振水泥一样的感觉。不过这纯属猜想!
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