【求助】硫酸铵分级沉淀

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标题:【求助】硫酸铵分级沉淀

龙小好汉[使用道具]
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发表于 2013-11-27 20:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我看到大多数用硫酸铵沉淀蛋白的时候都是按饱和度的由低到高进行分级沉淀的,而且硫酸铵饱和度计算表上也都是又低到高,只要根据这个表查询就可以了,但如果从高浓度到低浓度进行分级沉淀应该怎么做，我的实验相关文献里就是从高到低来做的的,我不知道加入低浓度硫酸铵时应怎么计算，希望有经验的朋友能给我提供帮助,谢谢!

nikun230[使用道具]
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发表于 2013-11-27 20:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 龙小好汉 于 2013-11-27 20:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我看到大多数用硫酸铵沉淀蛋白的时候都是按饱和度的由低到高进行分级沉淀的,而且硫酸铵饱和度计算表上也都是又低到高,只要根据这个表查询就可以了,但如果从高浓度到低浓度进行分级沉淀应该怎么做，我的实验相关文献里 ...

不太明白！
是不是稀释体积，缩小盐浓度。

kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-11-27 20:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

挺奇怪的，一般都是从低到高

由低到高主要是因为可以先沉下一部分蛋白。。。再提高浓度沉下一部分。。。再一部分。。。“分级”沉淀
> 但是由高到低的话应该是一下子就先沉下所有蛋白，然后。。？目的是什么？

能否请楼主提供一下原文？欢迎大家讨论！

ffaa[使用道具]
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发表于 2013-11-27 20:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

文献过大，我简单描述一下
１．水稀释样品
２．在上清中加入１９％的硫酸铵
３．离心，取沉淀
４．溶解沉淀加入１４％硫酸铵
我就是想知道最后那个１４％怎么确定量，稀释沉淀？如何将饱和度在１９％的沉淀稀释到一个低于１４％的饱和度呢？

kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-11-27 20:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得是不是还是从低到高的呀？是再加入14%，也就是终浓度到33%吧？

个人意见，供参考！

gogo[使用道具]
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发表于 2013-11-27 20:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

相关疾病：
腹水
我的理解与small版主有些不同，如下：
其实这个方法与硫酸铵进行小鼠腹水抗体的提取是一样的，腹水中抗体用硫酸粗提是这样的，先用50％的SAS完全沉淀，然后再加入33％的SAS进行洗涤，去除在33％的SAS中不溶解的，这个我以前做过，主要是因为先用50％的SAS沉淀可以将大部分抗体沉淀下来，而抗体主要是在33％SAS中沉淀，所以加33％溶解去除一些杂蛋白。33％的SAS配制就是将饱和硫酸铵1份加2份的水配制而成，加入沉淀中进行溶解。
这里的道理我猜想是一样的，先19％进行完全沉淀，然后再用14％的SAS进行洗涤，就是将100％SAS稀释成14％的加入即可。
个人意见，供参考！

kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-11-27 20:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

欢迎讨论！

是再加入14%的还是将19%的稀释成14%的？

fqswdzd[使用道具]
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发表于 2013-11-27 20:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的理解与small版主有些不同，如下：
其实这个方法与硫酸铵进行小鼠腹水抗体的提取是一样的，腹水中抗体用硫酸粗提是这样的，先用50％的SAS完全沉淀，然后再加入33％的SAS进行洗涤，去除在33％的SAS中不溶解的，这个我以前做过，主要是因为先用50％的SAS沉淀可以将大部分抗体沉淀下来，而抗体主要是在33％SAS中沉淀，所以加33％溶解去除一些杂蛋白。33％的SAS配制就是将饱和硫酸铵1份加2份的水配制而成，加入沉淀中进行溶解。
这里的道理我猜想是一样的，先19％进行完全沉淀，然后再用14％的SAS进行洗涤，就是将100％SAS稀释成14％的加入即可。
个人意见，供参考！

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做抗体纯化确实有这种方式。这里14%的饱和度应该是后加的，样本用19%获得沉淀后，然后用14%饱和度的溶液溶解。也就是说这种蛋白在14%--19%饱和度的条件下是大部分不溶解的

龙小好汉[使用道具]
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发表于 2013-11-27 20:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

33％的SAS配制就是将饱和硫酸铵1份加2份的水配制而成后的溶液就是３３％吗？你可以参见硫酸铵饱和度常用表，从表上可以看出各个饱和度所加入的硫酸铵的量是不同且无规律的，所以我不知道你这样稀释准确与否？
请看下表：

附件

2013-11-27 20:50

19799058.snap.jpg (86.96 KB)

zhezhe[使用道具]
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发表于 2013-11-27 20:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Hofmeister法与Osborne法两种，前者的饱和度定义为：
饱和度＝饱和硫酸铵容积/水容积加饱和硫酸铵容积。
Osborne法饱和度＝向溶液中加入的硫酸铵量/溶液中的水能溶解得了的硫酸铵的最大量。
Hofmeister法的计算公式为X＝aV/(100-a)，a为所需饱和度，V为蛋白溶液体积。哪么将100ml的水成为33％的饱和硫酸铵，由此公式计算约为50ml，
Osborne法的计算公式为：
X＝G（S2-S1）/（1-AS2），X为将1L饱和度为S1的溶液提高到S2时所需硫酸铵的加入量，G（20度为756），A（20度为0.29）。为约需加入27.6g。
这两种方法对同一饱和度计算所需加入的硫酸铵的浓度是不同的，Hofmeister法会扩大溶液的体积，在这种情况下一般用Hofmeister法，另外不同的计算方法结果都有一定差别，如查Osborne表法与Osborne公式法我所得的结果也不同。Osborne法中需注意的是，向已含硫酸铵的溶液中进一步加入硫酸铵使达到更高的饱和度时，应考虑由于加入硫酸铵而可能使流量增加，须以其中的水的容积为基准进行计算。其实最后这名话我也没能完全理解，表中的初始浓度低的时候达到更高的饱和度所需加的硫酸铵的量不如更高初始浓度的时候达到更高的饱和度加入的多，应该是计算标准的问题而不是物理现象。

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