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标题:【求助】western跑成这样，蒙了

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发表于 2013-12-1 23:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】western跑成这样，蒙了

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 小中大
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 小中大
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 小中大
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发表于 2013-12-1 23:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看了你的图，我也蒙了，呵呵。

似乎需要先从样品制备、制胶着手纠正了。
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 小中大

回复 #5 ffooll 的帖子

浓缩胶是5%的，分离胶是10%的，用的4×上样缓冲液，DTT终浓度为200mM，这个溴酚蓝一开始就压缩不到一起
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 小中大

也可以继续做western，或者考马斯亮蓝染一下。溴酚蓝不好，不能说明带型不好。
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发表于 2013-12-1 23:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你先考染下，再讨论吧，正如上面说的，溴酚蓝不好，不能说明带型不好。

从图上看，你的MARKER压缩得不好，所以目的蛋白的条带估计也不好。
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quiqui008[使用道具]
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 小中大
我做的是内皮细胞胞浆和胞核的蛋白，蛋白提取试剂盒采用的上海生工的产品，采用六孔板培养细胞，每孔细胞长至90%时提蛋白，每孔提出胞浆蛋白液100μ L，胞核蛋白液40μ L ，采用4×上样缓冲液（配方：SDS
0.4g, 甘油2mL，PH6.8 0.1M
Tris-HCL定容5mL,溴酚蓝终浓度为0.02%,DTT终浓度200mM),跑电泳时溴酚蓝不能压缩，就像附图那样很弥散，转膜，曝光后，条带也成弥散状
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发表于 2013-12-1 23:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先你的胶应该有问题。你下层胶凝固多久？我一般凝固1个小时（我觉得凝固时间长点会好些）。溴酚蓝不好没什么大影响，你上面3个图片左边的是核蛋白，右边的是胞浆蛋白吗？你的溴酚蓝弥散还有个可能，就是蛋白里面有DNA，DNA比半百跑的快。
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