小中大看来将目的片断连接到表达载体中,测序酶切都是正确的,然后表达不出来的人还真的不少。我也是其中的一员。而且我用同一个基因在细胞中转染就已经表达。后来我诱导过夜(其实是我晚上不想去实验室收样品),第二天检测结果出来了,我也不知道到底是不是因为诱导时间的问题。不过我刚刚在核算板块看见一个帖子,他诱导3,6小时都没蛋白表达,也是诱导24小时才有蛋白表达,所以我想我和他的情况差不多。
这是帖子的连接:
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=3350463&sty=1&tpg=2&age=0')
他这样描述的:这几天我自己诱导表达一个蛋白,同样分别在37度,28度进行诱导,IPTG浓度0.1M,诱导3、6小时均没有目的蛋白,后来我们将诱导时间延至24小时,37度下诱导表达成功(低温诱导没有再做)。