小中大【求助】小分子蛋白质纯化实验日志
有意思也很折腾人的一个蛋白质，实验日志陆续整理中，希望大家多提供宝贵建议，谢谢！
小分子蛋白质分子量6600（编号LWP-1），等电点6.7
纯化目的：一是先获取3-5 mg，纯度大于85%目的蛋白质；二是可能的话，建工艺，为可能的中试铺路。
1. 表达
1.1 表达情况
原核表达，表达量高（10%左右），上清形式表达。SDS-PAGE检测分子量位置在12-13KD左右，经免疫印迹鉴定确实为目的蛋白质，但是其电泳位置确是实际分子量的2倍左右。
1.2分析
针对分子量高的问题，我们初步分析该类蛋白质电泳迁移率异常或者极易形成二聚体甚至多聚体（即便在含有还原剂巯基乙醇的SDS-PAGE电泳中仍难以解聚）。尝试在SDS-PAGE中增大巯基乙醇的量及进行非还原SDS-PAGE电泳（即在上样缓冲液中去除巯基乙醇）来分析是否是多聚体形式。
1.3 结果
不含β-巯基乙醇的Loadding 含1倍β-巯基乙醇的Loadding（5%β-巯基乙醇 含3倍β-巯基乙醇的Loadding （15%β-巯基乙醇）检测样本（SDS-PAGE），未发现三者有区别。
1.4 分析
提示LWP-1自聚体的现象不是由二硫键引起。氨基酸序列分析该蛋白质不含半胱氨酸。后续离子交换层析未提示该蛋白质极酸极碱的特征，所以电泳迁移率异常的原因也基本排除。
