小中大【求助】WB实验真磨人
大家好!我是WB菜鸟,实验过程中发现问题一大堆,且听我慢慢道来。目的蛋白是127Kda,内参蛋白是37Kda,我用的是BIO-RAD Mini-Protean II Electrophoresis Cell 系统,直接买BIO-RAD的胶,根据说明书,跑电泳时用的条件是200V,电流60mA,1小时左右,转膜条件是100V,电流350mA, 1小时,但由于我用的机器的电流最大只能提供300mA,所以我就调的是100V,300mA,1小时,但奇怪了,转膜完了发现膜上面和胶上面的预染的MARKER都没有了(三明治顺序没有问题),难道转过了?唯一的一次转膜成功了,曝光后发现只有目的蛋白条带,内参没出来,去哪里了呢?还有,转膜后胶和膜总是融为一体,怎么剥都剥不下来,我都是一小块一小块的弄下来的,那个折腾呀!又是为什么呢?欢迎各位蛋白高手出手相助,先谢谢了!