蛋白质与蛋白组学

胰酶没有那么厉害，作用细胞几分钟不可能降解很多蛋白，最多是一些ECM，你用了多少裂解液去裂解？这个才是决定浓度的重要因素。

我不能说肯定排除胰酶的作用，但我养细胞几百种，用过的胰酶以L来计，还没听过胰酶消化30min可以把细胞内蛋白消化掉的。因为基本上胰酶是不可能破细胞膜的。常规细胞室温消化，15min也不少见，细胞都能存活。

你这个protocol非常诡异，冰上裂解的这种protocol，应该是用的非sds去垢剂，5min裂解，那么你离心，之后，主要骨架蛋白都在沉淀里，你总不会去上清去测浓度吧，那样你不会有多少蛋白的，因为细胞的80%以上的蛋白在5min的冰上裂解环境下，都会在14000rpm离心后的沉淀里，因为这么方法，这么短时间裂解：
1，细胞核可能还没破呢，核蛋白全在沉淀里
2，细胞质骨架蛋白还没完全溶解呢，你离心得到的都是细胞质可溶蛋白，含量自然很低。

建议你延长裂解时间，4度旋转1hr，或者更换裂解protocol，直接sds裂解。另外，还要排除你这个裂解液对测定方法的干扰。

很简单的rotator，没有转速的，只是缓慢旋转，大概15s一圈吧。你这个蛋白提了后续做什么实验啊？只有做IP实验，才需要这样冰上裂解操作，一般的wb直接用sds裂解buffer处理就可以了。