蛋白质与蛋白组学

谢谢，我还有个很初级的问题，就是像DEAE和CM这种离子交换层析胶，初始我保存在20%乙醇里，每次用之前是不是要进行一些处理，主要是挂阴阳离子？比如DEAE好像用碱酸碱的顺序，这样做的目的是让胶体挂上阴离子吗？这些步骤是必须的吗？
说到胶的材料，汗~~~我们只有Sephadex和纤维素之类的，我们太不专业了啊太不专业了……

20%乙醇是抑菌作用。用之前将其冲洗干净即可，用什么溶液冲等下说。DEAE用碱酸碱的顺序，我没这么做过，大概是sepharose基质不需要，可能是纤维素的需要吧。

从20%乙醇拿出来准备使用了，要用纯化水或者平衡溶液将20%乙醇冲净，一般平衡的过程就能同时冲净这些乙醇了。
使用前最重要的就是平衡了，把柱子装好，向里通平衡溶液，待到进入柱子的溶液和流出的溶液的pH值一致了，且比较稳定，那么柱子就平衡好了。平衡好了之后才能稳定地吸附和洗脱蛋白，各次的洗脱效果一致性比较高，所以是必须有的步骤。以上内容在我发的那个文件里有详细介绍。

Sephadex的是离子交换介质还是分子筛？Sephadex可能比纤维素的更好些，用它做离子交换分离的时候不要装太高的柱子即可，这个树脂很软，装高了不耐压且柱效不好。

还是多做实验，效果不好也没关系，别把树脂搞废了，下次继续。

祝顺

是这样的，不同的离子强度下，填料本身带的电荷与样品的电荷是会一致，这样样品吸附不到填料上，然后样品和杂质就被分开。这个是理想状态，通常实验时候，会形成部分吸附，部分流穿的情况。
上样量方面，建议你用预装柱做个小试，走个饱和上样量。这个的前提是要有精确的检测方法来检测你的目的蛋白和杂蛋白的蛋白量总和。推荐用定量试剂盒。
柱子收缩我也碰到过，基本没什么影响，只是峰比较难看，该收的时候收下来会被稀释。建议你碰到这个问题的时候，用大于工作流速的速度装柱子。不然，就用预装柱来实验。