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标题:【求助】等电聚焦后有白色物质析出是怎么回事

66小飞侠[使用道具]
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【求助】等电聚焦后有白色物质析出是怎么回事

我做的是小鼠肺组织的双向电泳,用的是11cm的胶条,pH3-10,等电聚焦后胶条从中间位置到酸性端有白色的物质析出,半个胶条都呈白色的,不知这是什么原因?有谁遇到过没?注:提蛋白时用的溶解液是8.5 mol/L urea,2.5 mol/L thiourea,5%CHAPS,不知道是不是urea和thiourea的浓度高了,导致聚焦时有urea结晶析出?
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jingling845[使用道具]
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你估计是长江以南地区的吧?
这个问题的原因是你进行实验时的室温太低,冬天易出现这个现象。解决办法:泡涨和聚焦过程中都开制热空调,或者在25摄氏度孵箱中泡涨和聚焦。总之温度保持在25摄氏度左右。

我做的是小鼠肺组织的双向电泳,用的是11cm的胶条,pH3-10,等电聚焦后胶条从中间位置到酸性端有白色的物质析出,半个胶条都呈白色的,不知这是什么原因?有谁遇到过没?注:提蛋白时用的溶解液是8.5 mol/L urea,2.5 mol/L thiourea,5%CHAPS,不知道是不是urea和thiourea的浓度高了,导致聚焦时有urea结晶析出?
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66小飞侠[使用道具]
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哈哈,被你说中了,我们的确是长江以南地区,江西这边的,呵呵!现在的室温只有十几度了,泡涨的时候开了空调,聚焦的时候就没开了,我以为这个问题会很严重呢,以为是我的样本又出现了大的问题,怀疑自己的溶解液里的尿素和硫脲的浓度过高引起的呢
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zhezhe[使用道具]
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我之前就一直遇到这种情况,一直苦思不得其解,原来是天气冷的原因啊
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QUOTE:
原帖由 zhezhe 于 2013-12-7 22:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我之前就一直遇到这种情况,一直苦思不得其解,原来是天气冷的原因啊

那你现在有所改善了吗?不会在看到了吧
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zhezhe[使用道具]
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回复 #5 66小飞侠 的帖子

没有,一直还存在这种现象,你的有所改善了吗?
我之前一直认为矿物油没有覆盖好,导致尿素结晶析出,或者是样品中有杂质导致的
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回复 #6 zhezhe 的帖子

我又重新提了次蛋白,但是还没跑,不知是不是溶解液里的Urea浓度高了,不过问过很多人说这个没事,不会影响结果,你的有影响吗?
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gogo[使用道具]
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呵呵,你放心跑吧,只要室温达到要求,我保证你不会再出这个问题。
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zhezhe[使用道具]
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没有,一直还存在这种现象,你的有所改善了吗?
我之前一直认为矿物油没有覆盖好,导致尿素结晶析出,或者是样品中有杂质导致的

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每次等电聚焦后,我的胶条从中间位置到酸性端都有白色物质,但是经过两次平衡后,这些白色物质都消失了,但是跑出的电泳图谱有横纵条纹,特别是酸性端
今天我有重新跑了一次,发现白色物质的地方没有矿物油覆盖,可能导致的,我的矿物油加的挺多的,不知道中间怎么搞的,就没了
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66小飞侠[使用道具]
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我重新提了次蛋白,聚焦时也开了空调,但是还是出现了这个问题,奇怪了?
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