蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】银染还是考染？？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】银染还是考染？？

kulee[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77361
精华 0
积分 615
帖子 849
信誉分 100
可用分 5127
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
1

发表于 2013-12-9 22:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】银染还是考染？？

请问各位前辈，您们都是做银染还是考染啊？银染的灵敏度高，但是有时候操作不好胶就变成大花脸了，而且听说银染的胶做一级质谱鉴定率只有30%， 考染要求蛋白上样量大，想请问考染比起银染来会丢失一些蛋白点吗？到底采用哪个比较好？？请各位前辈指点！！谢谢！！
顶部
yychen[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77452
精华 0
积分 516
帖子 751
信誉分 100
可用分 4495
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
2

发表于 2013-12-9 22:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道你的具体要求是怎样的，如果是进行差异比较的话就用银染，这个灵敏度高，可以鉴定出更多的蛋白点，如果要进行后续的质谱鉴定的话就用考染。
其实银染的鉴定率也不见得这么低，鉴定率低的话你可以适当加大上样量，另外还要看你酶解的工作了。酶解好了质谱同样可以检测到更多的蛋白质点的。
顶部
kulee[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77361
精华 0
积分 615
帖子 849
信誉分 100
可用分 5127
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
3

发表于 2013-12-9 22:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 yychen 于 2013-12-9 22:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

不知道你的具体要求是怎样的，如果是进行差异比较的话就用银染，这个灵敏度高，可以鉴定出更多的蛋白点，如果要进行后续的质谱鉴定的话就用考染。
其实银染的鉴定率也不见得这么低，鉴定率低的话你可以适当加大上样量，另外还要 ...

谢谢前辈，我以后要做质谱，这两次做银染背景老花花的，都快疯了。。。。。
顶部
gogo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77052
精华 0
积分 821
帖子 1341
信誉分 100
可用分 7487
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
4

发表于 2013-12-9 22:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

听过制备胶没有？制备胶的意思就是专门为质谱鉴定而准备的，你可以这样操作，图谱分析的时候采用银染，分析完后标记好需要鉴定的差异点，然后你专门做一块考染的凝胶，从考染的凝胶上挖取差异点做鉴定，这样整个问题就解决了！不过银染其实最大的问题倒不是你说的质谱鉴定（现在很多质谱鉴定都采用串联质谱、只要各方面技术比较好的话，鉴定成功率一般在80%左右应该是可以达到的），而是重复性，重复性不好，导致分析困难，所以我自己整个实验用的都是考染！只要上样量得到，电泳程序合适，考染也可以做得跟银染差不多的效果！
顶部
kulee[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77361
精华 0
积分 615
帖子 849
信誉分 100
可用分 5127
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
5

发表于 2013-12-9 22:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 gogo 于 2013-12-9 22:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

听过制备胶没有？制备胶的意思就是专门为质谱鉴定而准备的，你可以这样操作，图谱分析的时候采用银染，分析完后标记好需要鉴定的差异点，然后你专门做一块考染的凝胶，从考染的凝胶上挖取差异点做鉴定，这样整个问题就解决了！不过 ...

谢谢前辈指导，您说的用银染分析，用考染质谱，但是有的点出现在银染的胶上 ，但是在考染上面找不到，这个问题咋办呢》？前辈能不能透露下您考染的方法，按照分子克隆上可以吗？
顶部
jujuba[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79697
精华 0
积分 612
帖子 903
信誉分 100
可用分 5331
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-14
状态 离线
6

发表于 2013-12-9 22:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果考染能染出来，就不要用银染，现在点数高的文章不太认银染的结果。
考染染不出来，实在不行才考虑换银染。做质谱鉴定的时候，银染胶不要加戊二醛，成功率会高很多，当然要找质谱水平高些的人来做。
顶部
HP007[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74166
精华 0
积分 446
帖子 612
信誉分 100
可用分 3833
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
7

发表于 2013-12-9 22:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
效果确实很不错，可以达到和银染差不多的效果，如果考染上找不到，那就只有从银染图谱上挖点了。至于质谱，确实如“好小猫”所说一方面不要加戊二醛，一方面找技术好的人，我的一个做了很多年质谱的朋友告诉我，一般银染成功率可以达到80%，考染可以达到95%。
顶部
子衿青青[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103467
精华 0
积分 212
帖子 164
信誉分 100
可用分 1556
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
8

发表于 2013-12-9 22:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做银染胶内酶解需要注意些什么啊
顶部