活细胞表面受体配体结合分析

G蛋白偶联受体与配体结合后,受体构象发生改变,7个跨膜区域的相对位置发生改变,将信号传递到胞内,影响细胞功能。受体配体结合是GPCR发挥功能的第一步。生物通 cuturl('www.ebiotrade.com')
进行受体配体结合检测有同位素方法和非同位素方法。基于滤膜的同位素方法是经典方法,但是它需要洗涤,操作复杂,对环境污染大,越来越多的人在寻求不需要洗涤的更安全的方法。闪烁亲近检测(SPA)是不需要洗涤的同位素方法,它操作简单一些,但是非常昂贵,并且还是基于同位素的检测平台。非同位素方法包括时间分辨荧光(TRF)和荧光偏振(FP)等方法,操作简单,对环境无污染,是受体配体结合检测的发展方向。
所有的实验方法都需要受体和标记配体,并且实验设计相似。在很多情况下,需要使用多种方法来满足下面的实验需求:生物通 cuturl('www.ebiotrade.com')
• 非特异结合低
• 在标记配体的Kd值范围,特异性结合率 > 80%生物通 cuturl('www.ebiotrade.com')
• 对于竞争性实验,标记配体的浓度 ≤ Kd
• 加入的标记配体的结合率 < 10%生物通 cuturl('www.ebiotrade.com')
• 没有受体存在的情况下,标记配体不产生浓度反应
• 实验能达到平衡,信号稳定生物通 cuturl('www.ebiotrade.com')
• 可重复性高
• 合适及稳定的检测窗口,例如Z’ > 0.5生物通 cuturl('www.ebiotrade.com')
Cisbio的Tag-lite技术将新出现的SNAP-Tag技术和经典的HTRF技术结合起来,稳定可靠,是同位素方法的替代解决方案。