【求助】Protein A 柱纯化抗体时为什么吸附不上去啊？

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标题:【求助】Protein A 柱纯化抗体时为什么吸附不上去啊？

mamamiya[使用道具]
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发表于 2013-12-12 15:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用Protein A 柱纯化抗体过程中，加样时抗体不吸附，出现很高的紫外波峰，所以洗脱时只有很低的波峰，为什么啊？如何解决啊？谢谢！

NBA[使用道具]
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发表于 2013-12-12 15:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #1 mamamiya 的帖子

问题提得太。。。太不专业了。

1、什么品牌的Protein A柱？

2、纯化何种抗体？IgA、IgG、IgM....

3、抗体种属来源？鼠、牛、马、绵羊、山羊、人....

4、单抗还是多抗？

5、原料样品体系？

6、纯化规模？样品多少、柱多大？

7、洗脱方法？

8、检测波长？

9、低峰值是多大？
......

mamamiya[使用道具]
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发表于 2013-12-12 15:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 NBA 于 2013-12-12 15:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
问题提得太。。。太不专业了。

1、什么品牌的Protein A柱？

2、纯化何种抗体？IgA、IgG、IgM....

3、抗体种属来源？鼠、牛、马、绵羊、山羊、人....

4、单抗还是多抗？

5、原料样品体系？

6、纯化规模？样品多少、柱多大？

...

相关疾病：
腹水
Bio-Rad公司的预装柱
IgG
鼠
单抗
腹水（辛酸-硫酸铵两步法粗纯）
10ml样品，5ml的预装柱
洗脱液是100mM的柠檬酸
吸光值是280nm
洗脱的波峰只有0.25

mamamiya[使用道具]
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发表于 2013-12-12 15:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #3 mamamiya 的帖子

相关疾病：
腹水
柱纯化前后的电泳图片如何？

一般单抗IgG腹水经过辛酸-硫酸铵纯化后纯度就比较好了，我有些怀疑你这两步沉淀纯化有问题。

另外沉淀纯化后用PBS溶解，再对PBS透析完全后上Protein A柱，不知道你是如何做的。

洗脱液柠檬酸的pH是多少？

mamamiya[使用道具]
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发表于 2013-12-12 15:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #4 mamamiya 的帖子

我是用PBS溶解的，也透析了啊，洗脱液柠檬酸的PH=3.0。

NBA[使用道具]
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发表于 2013-12-12 15:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 mamamiya 于 2013-12-12 15:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我是用PBS溶解的，也透析了啊，洗脱液柠檬酸的PH=3.0。

检查柱纯化前后的电泳图，检查PBS的pH值。

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2013-12-12 15:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

提高吸附缓冲液和样品的pH8-9，可同时加2M NaCl，这样可提高抗体和蛋白A的作用力。应该会好点。