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标题:【讨论帖】我在SDS-PAGE中所犯的错误

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【讨论帖】我在SDS-PAGE中所犯的错误


前些日子做SDSPAGE,做了两天,犯了一大堆错误,写出来供大家借鉴:
1。听有人说琼脂粉可以做封底胶,一试,漏了,还是用琼脂糖吧。
2 AP用别人旧的,结果胶不干
3 A液,B液用旧的,不干。
结论:不要用别人的,一定要自已配,别怕浪费。
4 前后Tris 的PH值搞错,结果不凝
5 电泳时长板接负极,反了
6 剥胶时,忘了切角,自已都不记得哪是哪的。
再剥时,分离胶与积层胶分开了,又搞不清什么是什么了。(可以用注射器向胶与玻璃之间注水,就可以很完整的剥下来。)
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我觉得防止记错加样顺序的方法可以是,MARKER两边加不同个数的样本。如:MARKER左边加了4个,右边加了5个。脱色完了,一看就明白了。
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vcve[使用道具]
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3
 

我对跑PAGE也是深有体会,说出来与大家共享。
1.我们的AP一般分装后放在-20冰柜中,用时拿出融化,这样使用保存时间很长。
2.上样时一定同时在实验记录上记下你的上样顺序,因为如果你跑整块胶一定是不同的样,因此,脱色后可以根据记录大致判断出加样顺序。还有,上面的仁兄说得中间偏向空一个孔,两边加不同数量的样也可;再或者记住marker的位置,同样不会弄错左右面。
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ha111[使用道具]
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4
 
楼主,你老弟真行,别人遇上一个二个问题也就罢了,你竟然全碰上了,真有你的。呵呵。

SDS-PAGE 所用的溶液一般有效期为一个月左右。但是10%SDS溶液的有效期为一周,且常温保存。如4度保存会结晶。AP的有效期也为一周。

我用的电泳仪是BIO-RAD的电泳仪,灌胶时不用封底。
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mysmdbl[使用道具]
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10%SDS溶液我常温存了半年多还是可以用的
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mimili_901[使用道具]
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6
 
我们溶液除了AP和temed都在室温放着,时间都在一个月以上(AP,三周以上),以前没有出现任何问题!不过最近靠近上边的带没有跑出来,就是缺带了,可能是时间太久了(有半年了),马上重配,再试试!
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zranqi_1[使用道具]
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7
 
我和同学做实验时配了1000ml 10%SDS,结果全科人用了一年多将近两年也没见出什么问题,也就是常温放置。
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kuaizige[使用道具]
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8
 
sds没问题的,但是低浓度ap最好当天使用,半衰期很短
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DONT[使用道具]
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sds一般可以常温保存不会失效,但AP最好每次都要新配,如果低温保存一般的保存时间是一周,最好不要超过两周,以免失效,反正我们可以少配。剥胶时我们可以一边撬玻璃板一边用流水冲洗,一会就可以完整的剥下来。
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gogo[使用道具]
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我这里AP在-20度放置,temed在4度放置,其他在室温放置,基本上多半年无问题。我的体会是,电泳缓冲液很重要,最好用数次就弃去,还有上槽液和下槽液要分开,用几次后,可以将上槽液改为下槽液,弃去下槽液。当然这是针对Bio-Rad这种上下槽分开的系统。
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