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标题:【求助】WB总是出现乌突突一片，什么原因？请教

vtongli[使用道具]
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发表于 2013-12-13 22:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】WB总是出现乌突突一片，什么原因？请教

如图，做WB beta-actin 整张膜总是出现乌突突一片，不知道什么原因，请教各位？


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2013-12-13 22:07
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jujuba[使用道具]
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发表于 2013-12-13 22:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、 可能胶做得不太好
2. 上样量太大了，建议上原来的1/10量
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qhyu[使用道具]
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发表于 2013-12-13 22:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 vtongli 于 2013-12-13 22:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
如图，做WB beta-actin 整张膜总是出现乌突突一片，不知道什么原因，请教各位？  

封闭不完全
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2013-12-13 22:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
估计看是不是封闭的问题！
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发表于 2013-12-13 22:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.是不是封闭的问题，封闭是有有气泡在那个位置
2.孵育二抗的时候有气泡或者是显影时出的问题
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发表于 2013-12-13 22:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

二抗孵育后，TBST多冲洗一遍膜，试试看，应该有帮助
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cwcwcww[使用道具]
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发表于 2013-12-13 22:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.封闭的问题
2.LZ是不是在显影的时候发光液加多了，最后又没吸干，导致发光液在膜和保鲜膜之间流淌把光都泄露到整张底片上了？如果是这样建议反应5-10min后用餐巾纸吸干发光液再显影
3.如果以上都不是，只能推测LZ膜在封闭前被污染了——不好好带手套，直接用手拿，手上的蛋白全上膜了
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发表于 2013-12-13 22:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是差不多的结果，想了好久都没有像明白怎么回事，楼上几位说的原因，基本上我都想过，还是不知道怎么回事。
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发表于 2013-12-13 22:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

重做一遍，细节决定成败。没洗干净，分不同时间，多几张曝光。
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2013-12-13 22:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

几个原因
1、上样量太大
2、封闭不彻底
3、没洗干净
4、二抗浓度太高或者抗体特异性太差
5、曝光时间太长

western做不出来是比较郁闷的 逐条排除原因吧
或者去别的实验室做做看 又或者让老手帮忙做一次试试看

细节决定成败 western失败的原因还是很多的
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