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标题:【求助】诡异的蛋白表达？

zhy平平[使用道具]
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发表于 2013-12-14 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】诡异的蛋白表达？

一个诱导测试有高表达的蛋白，在大规模表达，破菌后，靶带位置竟然没有条带了？注意，跟其他几个蛋白同步做的，可以互为对照。请各位帮忙分析下！
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utt0989[使用道具]
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发表于 2013-12-14 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
经过中试吗？培养规模一下子放大很可能需要再优化表达条件的。
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3648755[使用道具]
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发表于 2013-12-14 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议：
1、检查是否电泳取错样品，重复电泳一次。

2、检查破菌上清，以及破菌沉淀中的表达。

3、重复小量诱导表达试验。

4、确定是否毒性蛋白抑制表达。
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zhy平平[使用道具]
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发表于 2013-12-14 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
相关疾病：
头痛
谢谢楼上几位的回答。我仔细检查过了，排除取错电泳样品可能，因为是多次实验。小量表达测试也重复过，是高表达。上清和沉淀在靶蛋白位置无明显高表达条带，且此蛋白非毒性蛋白。头痛死了，一接大规模，就消失了！！！
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3648755[使用道具]
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发表于 2013-12-14 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大规模有多大，是摇瓶还是发酵罐？
小量诱导表达是上清表达还是包涵体？
培养基有无差异？
破菌前的全菌样电泳有无表达？
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-12-14 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

小量诱导表达，1ml TB
大量表达是400ml LB
总感觉是不是质粒丢失了，应该不会是破菌的操作原因，有其他几个蛋白做对照
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zhy平平[使用道具]
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发表于 2013-12-14 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


小量诱导表达，1ml TB
大量表达是400ml LB
总感觉是不是质粒丢失了，应该不会是破菌的操作原因，有其他几个蛋白做对照
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one[使用道具]
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发表于 2013-12-14 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1:400的比例有点高，而且前后的培养基有点差别（这个应该问题不太大）
有时候表达量的高低和诱导时菌液的OD值有关系
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one[使用道具]
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发表于 2013-12-14 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议先用100ml的小瓶做个表达试试
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2013-12-14 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你摇400ml的菌液是用什么摇的，容器体积多大？如果液体占总体积的比例太大，就会造成菌液供氧不好，会影响蛋白的表达！
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