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标题:【求助】乙酰胆碱酯酶的显色反应相关问题

dragonkilly[使用道具]
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【求助】乙酰胆碱酯酶的显色反应相关问题

乙酰胆碱酯酶可以水解碘化硫代乙酰胆碱,生成的碘化硫代胆碱可以与DTNB反应生成黄色物质,但这种黄色在普通的滤纸上并不明显,请问哪位高手有更好的工艺方法呢?
或者使用其他的显色反应,可以在滤纸上观察的,乙酰胆碱酯酶有别的显色反应吗?原理是什么呢?
查到植物酯酶可以催化乙酸萘酯水解与固蓝B发生显色反应,那么动物乙酰胆碱酯酶也可以吗?
还查到碱性磷酸酶有与BCIP/NBP的显色反应,请问乙酰胆碱酯酶属于碱性磷酸酶吗?
谢谢!
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owanaka[使用道具]
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原帖由 dragonkilly 于 2013-12-15 11:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
乙酰胆碱酯酶可以水解碘化硫代乙酰胆碱,生成的碘化硫代胆碱可以与DTNB反应生成黄色物质,但这种黄色在普通的滤纸上并不明显,请问哪位高手有更好的工艺方法呢?
或者使用其他的显色反应,可以在滤纸上观察的,乙酰胆碱酯酶有别 ...

你这个试验的目的是什么?测定乙酰胆碱酯酶活性?
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dragonkilly[使用道具]
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原帖由 owanaka 于 2013-12-15 11:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')



你这个试验的目的是什么?测定乙酰胆碱酯酶活性?

是的呀
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koook5695[使用道具]
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原帖由 dragonkilly 于 2013-12-15 11:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
乙酰胆碱酯酶可以水解碘化硫代乙酰胆碱,生成的碘化硫代胆碱可以与DTNB反应生成黄色物质,但这种黄色在普通的滤纸上并不明显,请问哪位高手有更好的工艺方法呢?
或者使用其他的显色反应,可以在滤纸上观察的,乙酰胆碱酯酶有别 ...

你既然是侧活性,怎么能用肉眼观察?当然要在分光光度计下观察光密度值。一般是在412nm下观察。OD越高,表示酶反应速度越快,酶活力越高。
我做过这个实验。都是用96孔板测的,顶多用比色皿。从未听说用滤纸观察的。
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dragonkilly[使用道具]
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原帖由 koook5695 于 2013-12-15 11:32 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


你既然是侧活性,怎么能用肉眼观察?当然要在分光光度计下观察光密度值。一般是在412nm下观察。OD越高,表示酶反应速度越快,酶活力越高。
我做过这个实验。都是用96孔板测的,顶多用比色皿。从未听说用滤纸观察的。 ...

对于利用酶标仪测定乙酰胆碱酯酶活性的实验我没有疑问。
我想问的是在滤纸上观察显色反应的问题,定性不定量。
有种有机磷杀虫剂残留快速检测试纸条您知道的吧?就是利用滤纸上乙酰胆碱酯酶的活性是否被有机磷杀虫剂抑制,从而是否有显色反应来检测的。学生想问的问题与这种试纸条相关。请赐教
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dragonkilly[使用道具]
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原帖由 koook5695 于 2013-12-15 11:32 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


你既然是侧活性,怎么能用肉眼观察?当然要在分光光度计下观察光密度值。一般是在412nm下观察。OD越高,表示酶反应速度越快,酶活力越高。
我做过这个实验。都是用96孔板测的,顶多用比色皿。从未听说用滤纸观察的。 ...

呃……还有,OD值的变化速率反应酶活力,而不是OD值本身越高,酶活力越高吧?
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koook5695[使用道具]
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回复 #6 dragonkilly 的帖子

我还真不知道你说的这个试纸。我想问问你做的是哪个有机磷农药呢?其在哪种剂量和给药途径方式下对AchE抑制率你大概知道多少么?
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dragonkilly[使用道具]
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原帖由 koook5695 于 2013-12-15 11:33 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我还真不知道你说的这个试纸。我想问问你做的是哪个有机磷农药呢?其在哪种剂量和给药途径方式下对AchE抑制率你大概知道多少么?


做DDVP。
我做的是昆虫,敏感品系点滴法LD50是0.0144微克/只,但现在的没这么敏感
您是做毒理的吧?
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vvmmoy[使用道具]
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乙酰胆碱酯酶活性的测定已经有很成熟的方法。有军事医学科学院毒物药物研究所在1970年代就建立了稳定的测定方法和检测试纸。
另外,我们可以依据文献,自己购买试剂检测的,主要的试剂有溴(氯)化乙酰胆碱,三氯化铁等,用722或752分光光度计就可以检测。
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nn255[使用道具]
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军科院已将此项技术转让给北京海涵时代医药公司
全血胆碱酯酶活性测定盒使用说明书
【产品注册号】
【标准编号】YZB/京 0533-2004
【主要性能】当有机磷毒物中毒抢救时,用于测定人全血胆碱酯酶活性。
【适用范围】适用于有机磷毒物(包括军用精神性毒剂和有机磷农药)中毒程度的快速鉴别,诊断和指导救治用药以及观察愈后效果。
【禁忌症】仅能对酸中毒者定性。
【注意事项】
1.比色时观察血斑最红的地方;
2.当光源变弱或标准斑点颜色分辩不清时应及时更换电池;
3.已打开的测定试纸应继续避光、防潮、禁酸碱,超过6小时不宜使用。
【提示性说明】取测定试纸一片,放在带凹槽的血样载片上,取一滴耳血,直接沾在测定试纸中央,血斑直径约7~9毫米。将平板血样载片盖上并下压固定,保温35~40℃(无条件时可放在患者腰间),20分钟后将血样放在测定盒光室上1/3的透光比色处,打开电源开关,与盒内标准比色板对比,观察血斑颜色最红处,判断胆碱酯酶活性。
【维护及保养】测定试纸避光、防潮、禁酸碱,测定盒长时间不用时,取出电池。
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