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标题:【求助】Origami(DE3)菌株的抗性质粒问题？

flower@@[使用道具]
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发表于 2013-12-15 13:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】Origami(DE3)菌株的抗性质粒问题？


最近做蛋白表达，接触到Origami(DE3)菌株，想到一个问题，就是Origami(DE3)中两个蛋白酶的缺陷是由两个质粒来维持的（四环素和卡纳），而这两个蛋白酶又是促进二硫键形成的，所以当我把氨苄抗性的质粒转进去之后，它就有了三种质粒的抗性。

我的问题是：当我提取我的质粒作酶切鉴定的时候，会不会把宿主菌带的那两个质粒也提取出来，那会不会很影响的酶切结果？PS:我酶切确实没有成功，不知道是酶的原因，还是上述原因？
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2013-12-15 23:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该不会吧，这个菌株在改造时，那两个基因应该是整合到基因组上面去了。我一直用这个菌来表达蛋白的，也提取过质粒，只有我的重组质粒没有别的呀
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发表于 2013-12-15 23:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Origami(DE3)菌株是用于蛋白表达用的，酶切鉴定最好用克隆菌株如DH5α或Top10等。在克隆菌株中鉴定好了之后，再转化Origami(DE3)表达蛋白！
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发表于 2013-12-15 23:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我这个菌株和相应载体的
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leifengta[使用道具]
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发表于 2013-12-15 23:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

提取质粒时得到的是你自己构建的那个
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lyxsqs[使用道具]
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发表于 2013-12-15 23:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有可能会的，因为当时我要用bl21提质粒的时候，我们的博士就告诉我说可能会提出它自带的。最好是用Top10或DH5a的提，这样子的提出来的质粒还更多。
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flower@@[使用道具]
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发表于 2013-12-15 23:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是整合在基因组上的，我咨询过GE的技术支持了
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