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标题:【求助】SDS-PAGE胶制备时，凝胶速度应控制在多久？

lagua123[使用道具]
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发表于 2013-12-19 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE胶制备时，凝胶速度应控制在多久？


SDS-PAGE胶制备时，凝胶速度应控制在多久，才会使最后的电泳结果在不考虑其他因素的情况下最好？？？15min？20min?25min??30min?40min?50min?60min?还是多少啊？？
我知道，太慢和太快都不好，要适中。那这个适中，到底是多久，什么情况下算是适中？？
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2013-12-19 10:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是新手,我说下我的看法.
胶凝的快慢和很多方面有关,其中最直接的我觉得应该是你所配胶的浓度(催化剂和加速剂的量)还有温度.
我觉得时间对胶的质量没有太大影响.
只要不是过分长时间,胶凝的时间最长越好,当然要保证筛孔不干燥.
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发表于 2013-12-19 10:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 lagua123 于 2013-12-19 10:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

SDS-PAGE胶制备时，凝胶速度应控制在多久，才会使最后的电泳结果在不考虑其他因素的情况下最好？？？15min？20min?25min??30min?40min?50min?60min?还是多少啊？？
我知道，太慢和太快都不好，要适中。那这个适中，到底是多久，什么情况下算 ...

我一般在配上下层胶是让其凝固30min，这样跑出来的胶比较好，一是节省时间，二是胶凝固的比较好。
如果你不怕麻烦，就是前一天配胶，然后包好放4度冰箱过夜，用之前提前拿到室温预热，也可以，跑出的胶也很好。
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lagua123[使用道具]
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发表于 2013-12-19 10:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ladyhuahua 于 2013-12-19 10:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


我一般在配上下层胶是让其凝固30min，这样跑出来的胶比较好，一是节省时间，二是胶凝固的比较好。
如果你不怕麻烦，就是前一天配胶，然后包好放4度冰箱过夜，用之前提前拿到室温预热，也可以，跑出的胶也很好。 ...

请问：依你的经验和配胶条件，配下层胶时，多久可明显看到分离界限？？？？
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tuuu2[使用道具]
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发表于 2013-12-19 10:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上战友已说过，这个与TEMED用量，AP质量，胶浓度，温度有关。
通常配制条件，室温20度左右的话，大概20min可以看到。
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taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2013-12-19 10:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦。我知道和那些有关，而且AP和TEMED的质量也有关系。
只是，想确定，多久出现分层、分层后再放置多久，这样制备的胶才是较好的。
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2013-12-19 10:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

SDS-PAGE胶 ，如果是不着急用的话，做完分离胶后20多分钟就可以浓缩胶了，做完浓缩胶后，4个多小时后胶的凝合效果就很好了，这时候，你拔下梳子，胶孔的基本不会变形，里面也不会有太多气泡。有时候，晚上做胶，放在4度冰箱里，第二天用效果也是很好的，这也是做一张好图的前提！！
到夏天室温高的时候，分离胶凝合的速度会很快，配胶、灌胶要迅速，否则胶聚合的程度会不均一，影响电泳效果！
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发表于 2013-12-19 10:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
说下我的观点。如果急用，分离胶30min就能凝固；浓缩胶则更快15min左右。我感觉只要你老实按操作步骤进行，应该是不会出问题。其实更多的时候问题是出在样品的制备上面。
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发表于 2013-12-19 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

室温也很重要的，冬天的凝固时间和夏天的会差得比较远，虽然你是在空调房里面，还是会有差异。室温20度左右，一般下层胶30-40分钟凝固比较好，上层胶其实还好，十几分钟就该凝固。主要是下层胶，上层一般影响不是很大，上层很少出问题。
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is2011[使用道具]
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发表于 2013-12-19 10:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看你APS和TEMED的量了
我们实验室20度左右
下层胶20分钟就凝了,不过我习惯30分钟
上层胶15-20min吧
一般我都是前一天做好放4度，第二天用。
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