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标题:【求助】蛋白点都消失了 咋回事

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发表于 2013-12-20 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白点都消失了 咋回事


各位前辈，今天跑了一次2D，胶体考染，用超纯水脱色以后觉得背景颜色有点深， 我就把它继续留在盘子了，想等背景颜色浅点了再扫描，可是等去看的时候蛋白点都没了，请问是怎么回事啊？已经染上色了，环境中难道有蛋白酶把蛋白降解了吗？？ 请各位前辈指教啊 郁闷至极。。。。。。。。
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发表于 2013-12-20 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
G250染的么？
脱色有加硫酸铵？
脱色把点的颜色脱点是正常的。应该不是降解。
我有把点脱到没颜色后再银染的 一样染的出来
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发表于 2013-12-20 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 redbutterfly 于 2013-12-20 17:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
G250染的么？
脱色有加硫酸铵？
脱色把点的颜色脱点是正常的。应该不是降解。
我有把点脱到没颜色后再银染的 一样染的出来

脱色就是用超纯水洗的，什么也没加啊
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发表于 2013-12-20 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

要么就是本来胶上就没有点．．．一般超纯水脱色不会脱把蛋白点的兰色脱干净，除非你加了１：４．５：４．５的乙酸／水／甲醇脱色，即使这样重新再染还可以把蛋白染上颜色，蛋白在凝胶里面蛋白酶不可能起到作用
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发表于 2013-12-20 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位前辈，今天跑了一次2D，胶体考染，用超纯水脱色以后觉得背景颜色有点深， 我就把它继续留在盘子了，想等背景颜色浅点了再扫描，可是等去看的时候蛋白点都没了，请问是怎么回事啊？已经染上色了，环境中难道有蛋白酶把蛋白降解了吗？？ 请各位前辈指教啊 郁闷至极。。。。。。。。

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我认为最好是用专门的脱色液脱色，我用的是甲醇、冰醋酸和蒸馏水的混合液，从来没出现过你那种情况！你试试！
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发表于 2013-12-20 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我认为最好是用专门的脱色液脱色，我用的是甲醇、冰醋酸和蒸馏水的混合液，从来没出现过你那种情况！你试试！

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胶体考染直接用纯水脱色就可以了
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发表于 2013-12-20 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
胶体考染直接用纯水脱色就可以了

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多谢前辈，还想请教个问题，跑完的胶在质谱之前一般怎么储存比较好？能保存多长时间呢？
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发表于 2013-12-20 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 TAT 于 2013-12-20 17:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
胶体考染直接用纯水脱色就可以了

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多谢前辈，还想请教个问题，跑完的胶在质谱之前一般怎么储存比较好？能保存多长时间呢？ ...

把胶用纯水润湿注意水不让太多然后用封口膜包起来，放在4度冰箱里，我们有放半年再去做质谱都没问题，但注意不要让胶长霉了
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发表于 2013-12-20 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
前辈 不好意思又要麻烦您，我的是pH4-7的24cm胶条，因为没用clean-up处理所以程序中除盐设置的时间长了些，100V 4h，200V 2h，500V 1h，1000V 1h，8000V 4h，8000V 65000vhr，总伏时85000vhr，但是跑出来的图总是有横条纹，请问是程序的问题吗？这个程序合适吗？
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2013-12-20 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
前辈 不好意思又要麻烦您，我的是pH4-7的24cm胶条，因为没用clean-up处理所以程序中除盐设置的时间长了些，100V 4h，200V 2h，500V 1h，1000V 1h，8000V 4h，8000V 65000vhr，总伏时85000vhr，但是跑出来的图总是有横条纹，请问是程序的问题吗？这个程序合适吗？

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基本上没有问题,你用滤纸片搭盐桥了么?升压过程最后达到8000V了么?方便的话发个图看看
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