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标题:【求助】分子量289kd western条件

mybioon[使用道具]
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发表于 2013-12-20 22:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】分子量289kd western条件

最近在做mTOR（分子量289kd), 很困难，有高手指教一下电泳和转膜的条件，非常非常感谢！
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glass[使用道具]
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发表于 2013-12-20 22:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这么大的没做过，我的170，190 一直在摸条件。我用的是 6%分离胶，300MA 2.5h转的还可以。胶上的条带基本都转过去了。你可以参照一下 。祝你顺利！
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mybioon[使用道具]
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发表于 2013-12-20 22:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

非常感谢，祝所以做 western的都能跑出漂亮的条带，
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abc816[使用道具]
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发表于 2013-12-20 22:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

270KD 4%的浓缩胶，6％的分离胶，湿转140v恒压3h，没有问题。
你可以试一下这个条件。
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cwcwcww[使用道具]
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发表于 2013-12-20 22:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

mTOR推荐Cell Signaling的mTOR Antibody #2972（如图）
其实mTOR比p-mTOR好做多了，8%的胶，你看着预染marker的250kd条带进入分离胶1cm左右就差不多了。建议100V，多跑跑~2hours。转膜用300mA，2hour足够了。


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发表于 2013-12-20 22:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我最近两次的电泳总跑不好，不知道什么原因，另外你的marker是哪个公司的，我的marker 电泳时看不见大分子量的条带，并且条带不均匀，请高手指点


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发表于 2013-12-20 22:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我订购的是 2983单克隆抗体，还没有到货。
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hustwb[使用道具]
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发表于 2013-12-20 22:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我要做270KD的，据说要用梯度胶，因为要跑内参，难道6%的分离胶actin跑不出去吗？请楼上各位指导下
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feima+[使用道具]
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发表于 2013-12-20 22:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主，你好。请问你用的内参和marker是哪种？谢谢！
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#问号#[使用道具]
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发表于 2013-12-20 22:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果目的蛋白分子量85，应该用什么浓度的分离胶？以及怎么样的转膜条件啊？
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