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标题:【求助】用核蛋白做WESTERN应该选什么做内参

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发表于 2013-12-21 09:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】用核蛋白做WESTERN应该选什么做内参


本人初做WESTERN,只知道GAPDH和beta-actin是常用的内参，我现在的标本提取的是核蛋白，想请教各位，核蛋白的内参可以用这两个吗？或者还有别的建议没，谢谢！！！
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发表于 2013-12-21 10:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 PINK 于 2013-12-21 09:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

本人初做WESTERN,只知道GAPDH和beta-actin是常用的内参，我现在的标本提取的是核蛋白，想请教各位，核蛋白的内参可以用这两个吗？或者还有别的建议没，谢谢！！！ ...

时提取总蛋白后做核蛋白
还是胞浆、胞核分别提取后做胞核蛋白？
胞核蛋白中会有一些beta-tubulin残留
如果只做核蛋白可以选择TBP等
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发表于 2013-12-21 10:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我直接提的是核蛋白。您所提的先提总蛋白在提核蛋白与胞浆、胞核分别提取后做胞核蛋白有什么区别吗？想请教您选取内参要注意一些什么？谢谢
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发表于 2013-12-21 10:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你可以参考一下abcam公司的一份protocol:
cuturl('www.abcam.com/technical/western') blotting-a beginner's guide，里面有不同组分的内参选择。
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发表于 2013-12-21 10:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

想请教一下各位
Lamin B1 Not suitable for samples where the nuclear envelope is removed.
TATA binding protein TBP Not suitable for samples where DNA is removed。
Lamin B1和TATA binding protein TBP 这两种蛋白是适合做核蛋白的内参，前者说的是不适合没核膜的样本，后者说是不适合做无DNA得样本，首先我的理解是对的吗？其此，我的蛋白是用碧云天的核蛋白抽提试剂盒抽提的，直接有一个核蛋白的抽提液，是不是第一个蛋白内参是不适合我的啊？盼回复！！！谢谢
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发表于 2013-12-21 10:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位我看了文献，有人把PCNA做为内参，可以吗？
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发表于 2013-12-21 10:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多看几篇文献，看别人都用什么作为内参
这是最保险的方法
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发表于 2013-12-21 10:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看过文献，有人用PCNA、Lamin B做内参，按照michaelmichael给的网站，搜素到不同的内参适应的标本也是不同的，Lamin B就不适合移去核膜的样本，现在暂定的内参为TBP蛋白。各位还有什么好的建议吗？
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发表于 2013-12-21 10:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我进sata cruz的网站找TBP蛋白的抗体，可是种属后面写的s和cerevisiae，其中S是什么意思，一般的种属不是只人、大鼠、小鼠吗？还要我做的是人来源的细胞，那该怎么选呢？还要请教各位，我想用TBP做核蛋白的内参，买那个公司的好啊？问题太多，希望各位能回答，谢谢
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