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标题:【求助】Native -page 胶浓度与蛋白大小的关系

nvdabing[使用道具]
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发表于 2013-12-21 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】Native -page 胶浓度与蛋白大小的关系


想问各位：SDS-page胶浓度与蛋白大小有一定关系，跑Native-page的时候，配胶的浓度应该怎么确定？与蛋白大小或蛋白带电荷有关？？？谢谢！
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二子[使用道具]
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发表于 2013-12-21 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

native page上蛋白质的迁移率与蛋白质的大小、形状和带电荷的多少有关，所以没有明确的法则，参考相关的文献吧。
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nvdabing[使用道具]
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发表于 2013-12-21 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也知道有关，但怎么初步确定呢？具体还不是很清楚？
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发表于 2013-12-21 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先要查阅相关文献，对你的蛋白有一定的了解，比如结构特点，PI，大小等，然后根据其以上特点来选择缓冲液的pH，胶的浓度要保证你的蛋白能够进到胶孔里面，这方面网上有很多文献可供你参考。
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2013-12-21 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我最近也在做native page 想看目的蛋白（25kd）是否多聚化
用12%和5%的时候 western检测有几条带，但是拖尾现象很严重
我把转膜后的page胶去考染，发现在积层胶和分离胶交界处有很浓的蛋白，而且有长长的拖尾。
今天我换了8%和4%的胶，发现转膜后丽春红染色就漂亮多了，整个pvdf上都有带出现。
so，lz多试试几个浓度。
希望有交流。
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finger[使用道具]
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发表于 2013-12-21 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我最近也在跑native page ，我用的是8%的，我的 目的蛋白是110kd的，可是老在分离胶的顶端。下不去了。，而且蛋白条带的两端比中间粗。还拖尾。
我不知道是什么原因。你们有什么好的建议吗？
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发表于 2013-12-21 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

仅供参考：
凝胶浓度T 分子质量范围（kDa） 凝胶浓度T 分子质量范围（kDa）
（c=2.6%） （c=5%）
5 30-200 5 60-700
10 50-100 10 22-280
15 10-50 15 10-200
20 2-5 20 5-150
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发表于 2013-12-21 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

乱了，重新发一下。仅供参考：
凝胶浓度T（c=2.6%） 分子质量范围（kDa）
T=5 分子质量范围：30-200
T=10 分子质量范围 ：15-100
T=15 分子质量范围 ：10-50
T=20 分子质量范围 ：2-5
凝胶浓度T（c=5%） 分子质量范围（kDa）
T=5 分子质量范围：60-700
T=10 分子质量范围 ：22-280
T=15 分子质量范围 ：10-200
T=20 分子质量范围 ：5-150
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发表于 2013-12-21 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢楼上各位，我正准备摸索条件！
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发表于 2013-12-21 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我和说你的情况一模一样，不过目的蛋白25kd
所以我现在也不知道到底是多聚化造成的 还是胶做的不好导致蛋白跑不下来。
过两天上图看看。
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