【求助】2-DE图像分析

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标题:【求助】2-DE图像分析

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发表于 2013-12-23 22:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请前辈帮我分析一下这几张图像存在的问题，本人刚开始做有很多问题不明白
我做的是大鼠大脑皮质线粒体蛋白的双向电泳，用18cm，ph3-10的胶条
左向右为胶条酸性端至碱性端
第一张

附件

2013-12-23 22:08

11821277.jpg (34.61 KB)

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发表于 2013-12-23 22:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

第二张

附件

2013-12-23 22:08

45193710.jpg (29.59 KB)

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发表于 2013-12-23 22:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

第三张（胶在染色时被弄破了）

附件

2013-12-23 22:08

55948991.jpg (38.85 KB)

mod=8048[使用道具]
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发表于 2013-12-23 22:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

把步骤写详细点，才好分析啊

okhaha[使用道具]
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发表于 2013-12-23 22:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

横托比较严重，调整第一项聚焦时间？
不过感觉应该是样品纯度的问题，如果样品够纯的话很少会托成这样的

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发表于 2013-12-23 22:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 mod=8048 于 2013-12-23 22:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

把步骤写详细点，才好分析啊

蛋白浓度约2mg/ml，被动水化18h，上样液总体积为350ul，聚焦程序为：
250V,1h；500V，1h；1000V，1h；4000V，1h；8000V，12h；500V,保持；总伏值约96000Vh，好像高了点。
二向恒流：20mA，20min；40mA，5h。采用银染。

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发表于 2013-12-23 22:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 okhaha 于 2013-12-23 22:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

横托比较严重，调整第一项聚焦时间？
不过感觉应该是样品纯度的问题，如果样品够纯的话很少会托成这样的

聚焦条件是参照相关文献的，这两天才发现人家用的是24cm 的胶条，我的18cm 的话应该是过聚焦了吧？总伏值是96000Vh，我打算将总伏值改为70000Vh试试，不知道会不会有所改善？
你所说的样品纯度的问题应该怎么看啊？

whitesheep[使用道具]
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发表于 2013-12-23 22:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你找找GE的手册，后面有过聚焦的例图跟你的对照一下，我觉得不像聚焦过头，像是样品处理的不好，你用clear-up kit或者TCA处理过了吗？

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发表于 2013-12-23 22:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 whitesheep 于 2013-12-23 22:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你找找GE的手册，后面有过聚焦的例图跟你的对照一下，我觉得不像聚焦过头，像是样品处理的不好，你用clear-up kit或者TCA处理过了吗？

我提的是大鼠大脑皮质线粒体的蛋白，浓度只有2.5mg/ml左右，量也只有1ml，怕再处理一下就没多少了，还有其他的解决方法吗？

queen[使用道具]
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发表于 2013-12-23 22:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

2.5 mg的蛋白就算用kit或TCA/丙酮处理，上银染应该是够的
处理下还是有必要哦
你的酸性端蛋白点基本没有可以考虑换pH 4-7的胶条

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