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标题:【求助】寻找保存酶的合适方法

ququer787[使用道具]
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【求助】寻找保存酶的合适方法

来到一个新的单位,需要研究老板找到的新基因蛋白质的功能,有大量的工作就是纯化酶蛋白,但这个酶的活性在磷酸盐缓冲液中丢失很快,想寻找合适的保存酶活性的方法。
希望能将酶溶液保存在-20°C,不用反复冻融,自己想到的只有增加甘油浓度,还有别的办法吗,求助于论坛的大虾们,先谢了!
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bling[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 ququer787 于 2013-12-23 22:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
来到一个新的单位,需要研究老板找到的新基因蛋白质的功能,有大量的工作就是纯化酶蛋白,但这个酶的活性在磷酸盐缓冲液中丢失很快,想寻找合适的保存酶活性的方法。
希望能将酶溶液保存在-20°C,不用反复冻融,自己想到的只有 ...

冻干保存。
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ququer787[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 bling 于 2013-12-23 22:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')



冻干保存。

谢谢!
可惜的是,我的蛋白质不够多,希望这个方法能用在我大规模纯化蛋白时。
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c86v[使用道具]
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磷酸盐缓冲液中丢失很快,可以试试别的缓冲体系例如:Tris, Ph可以摸索一下
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zwsyrt[使用道具]
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冻在-80度会比较好一些
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先推荐一篇文章《从纯化到星辰》
以下是部分摘录:
不过Burgess最自豪的,还是他的“万金油”buffer。他告诉我们说,他几十年了,总喜欢用这个buffer的配方,什么蛋白都喜欢这种buffer, 可以说到了包治百病的神奇地步。尽管他吹得神乎其神,配方却十分简单。这个buffer叫TGE,就是Tris, glycerol 和 EDTA。配方是这样的:
50mM Tris pH 7.9
0.5mM EDTA
50mM NaCl
5% glycerol  
Tris EDTA NaCl 这三样都没什么,真正关键的是5%glycerol。有了这个glycerol, 很多蛋白,尤其是酶会十分稳定。这个稳定的效果是十分惊人的。
cuturl('http://hi.baidu.com/baohuge/blog/item/81ae46cf1e2bb83cf9dc61e4.html')
我也忘了这个是不是全的了。在百度上慢慢找吧,这个文章值得一看
祝顺
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xueyouzhang[使用道具]
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我也做到关于酶的问题,正为保存条件头疼,希望早点找到有效解决途径......
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